Nature.com സന്ദർശിച്ചതിന് നന്ദി.നിങ്ങൾ ഉപയോഗിക്കുന്ന ബ്രൗസർ പതിപ്പിന് പരിമിതമായ CSS പിന്തുണയുണ്ട്.മികച്ച അനുഭവത്തിനായി, നിങ്ങൾ ഒരു അപ്‌ഡേറ്റ് ചെയ്‌ത ബ്രൗസർ ഉപയോഗിക്കാൻ ഞങ്ങൾ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു (അല്ലെങ്കിൽ Internet Explorer-ൽ അനുയോജ്യത മോഡ് പ്രവർത്തനരഹിതമാക്കുക).അതിനിടയിൽ, തുടർച്ചയായ പിന്തുണ ഉറപ്പാക്കാൻ, ഞങ്ങൾ ശൈലികളും JavaScript ഇല്ലാതെ സൈറ്റ് റെൻഡർ ചെയ്യും.
ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഗോണ്ടി ഒരു ഇൻട്രാ സെല്ലുലാർ പ്രോട്ടോസോവൻ പരാന്നഭോജിയാണ്, ഇത് അണുബാധയുള്ള ഹോസ്റ്റിന്റെ സൂക്ഷ്മപരിസ്ഥിതിയെ മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യുന്നു, ഇത് ബ്രെയിൻ ട്യൂമർ വളർച്ചയുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.ഈ പഠനത്തിൽ, ടോക്സോപ്ലാസ്മ അണുബാധയിൽ നിന്നുള്ള എക്സോസോമൽ miRNA-21 ബ്രെയിൻ ട്യൂമർ വളർച്ചയെ പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങൾ അനുമാനിക്കുന്നു.ടോക്സോപ്ലാസ്മ ബാധിച്ച BV2 മൈക്രോഗ്ലിയയിൽ നിന്നുള്ള എക്സോസോമുകൾ സ്വഭാവ സവിശേഷതയാണ്, U87 ഗ്ലിയോമ സെല്ലുകളുടെ ആന്തരികവൽക്കരണം സ്ഥിരീകരിച്ചു.ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഗോണ്ടിയും ട്യൂമർ സോർട്ടിംഗുമായി ബന്ധപ്പെട്ട മൈക്രോആർഎൻഎ, മൈക്രോആർഎൻഎ-21 എ-5 പി എന്നിവയുടെ ശ്രേണികൾ ഉപയോഗിച്ച് എക്സോസോമൽ മൈക്രോആർഎൻഎ എക്സ്പ്രഷൻ പ്രൊഫൈലുകൾ വിശകലനം ചെയ്തു.എക്സോസോമുകളിലെ miR-21 ലെവലുകൾ മാറ്റിക്കൊണ്ട് U87 ഗ്ലിയോമ സെല്ലുകളിലെ ട്യൂമർ-അസോസിയേറ്റഡ് ജീനുകളുടെ mRNA ലെവലും ഹ്യൂമൻ U87 ഗ്ലിയോമ സെൽ വ്യാപനത്തിൽ എക്സോസോമുകളുടെ സ്വാധീനവും ഞങ്ങൾ അന്വേഷിച്ചു.ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഗോണ്ടി ബാധിച്ച U87 ഗ്ലിയോമ സെല്ലുകളുടെ എക്സോസോമുകളിൽ, മൈക്രോആർഎൻഎ-21 ന്റെ എക്സ്പ്രഷൻ വർദ്ധിക്കുകയും ആന്റിട്യൂമർ ജീനുകളുടെ (FoxO1, PTEN, PDCD4) പ്രവർത്തനം കുറയുകയും ചെയ്യുന്നു.ടോക്സോപ്ലാസ്മ ബാധിച്ച BV2-ഉത്പന്നമായ എക്സോസോമുകൾ U87 ഗ്ലിയോമ കോശങ്ങളുടെ വ്യാപനത്തിന് കാരണമാകുന്നു.എക്സോസോമുകൾ ഒരു മൗസ് ട്യൂമർ മാതൃകയിൽ U87 കോശങ്ങളുടെ വളർച്ചയെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നു.ടോക്സോപ്ലാസ്മ ബാധിച്ച BV2 മൈക്രോഗ്ലിയയിൽ വർദ്ധിച്ച എക്സോസോമൽ miR-21, ആന്റിട്യൂമർ ജീനുകളെ കുറച്ചുകൊണ്ട് U87 ഗ്ലിയോമ സെല്ലുകളിൽ സെൽ വളർച്ചാ പ്രമോട്ടർ എന്ന നിലയിൽ ഒരു പ്രധാന പങ്ക് വഹിക്കുമെന്ന് ഞങ്ങൾ നിർദ്ദേശിക്കുന്നു.
2018-ൽ ലോകമെമ്പാടും 18.1 ദശലക്ഷത്തിലധികം വിപുലമായ കാൻസർ രോഗനിർണയം നടത്തിയതായി കണക്കാക്കപ്പെടുന്നു, ഓരോ വർഷവും ഏകദേശം 297,000 കേന്ദ്ര നാഡീവ്യൂഹം മുഴകൾ രോഗനിർണ്ണയം ചെയ്യപ്പെടുന്നു (എല്ലാ മുഴകളുടെയും 1.6%)1.മനുഷ്യ മസ്തിഷ്ക മുഴകൾ വികസിപ്പിക്കുന്നതിനുള്ള അപകട ഘടകങ്ങളിൽ വിവിധ രാസ ഉൽപന്നങ്ങൾ, കുടുംബ ചരിത്രം, ഹെഡ് തെറാപ്പിറ്റിക്, ഡയഗ്നോസ്റ്റിക് ഉപകരണങ്ങളിൽ നിന്നുള്ള അയോണൈസിംഗ് റേഡിയേഷൻ എന്നിവ ഉൾപ്പെടുന്നുവെന്ന് മുൻ ഗവേഷണങ്ങൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്.എന്നിരുന്നാലും, ഈ മാരകരോഗങ്ങളുടെ കൃത്യമായ കാരണം അജ്ഞാതമാണ്.ലോകമെമ്പാടുമുള്ള ക്യാൻസറുകളിൽ ഏകദേശം 20% വൈറസുകൾ, ബാക്ടീരിയകൾ, പരാന്നഭോജികൾ എന്നിവയുൾപ്പെടെയുള്ള പകർച്ചവ്യാധികൾ മൂലമാണ് ഉണ്ടാകുന്നത്3,4.സാംക്രമിക രോഗകാരികൾ ഡിഎൻഎ റിപ്പയർ, സെൽ സൈക്കിൾ തുടങ്ങിയ ആതിഥേയ കോശത്തിന്റെ ജനിതക സംവിധാനങ്ങളെ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്നു, ഇത് വിട്ടുമാറാത്ത വീക്കത്തിനും രോഗപ്രതിരോധവ്യവസ്ഥയുടെ നാശത്തിനും ഇടയാക്കും5.
ഹ്യൂമൻ പാപ്പിലോമ വൈറസുകളും ഹെപ്പറ്റൈറ്റിസ് ബി, സി വൈറസുകളും ഉൾപ്പെടെയുള്ള ഏറ്റവും സാധാരണമായ വൈറൽ രോഗാണുക്കളാണ് മനുഷ്യ കാൻസറുമായി ബന്ധപ്പെട്ട പകർച്ചവ്യാധികൾ.പരാന്നഭോജികൾക്കും മനുഷ്യ ക്യാൻസർ വികസിപ്പിക്കുന്നതിൽ ഒരു പ്രധാന പങ്ക് വഹിക്കാൻ കഴിയും.Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis, Hymenolepis nana എന്നിങ്ങനെ നിരവധി പരാന്നഭോജികൾ വിവിധ തരത്തിലുള്ള മനുഷ്യ കാൻസറുകളിൽ ഉൾപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട് 6,7,8.
രോഗബാധിതരായ ആതിഥേയ കോശങ്ങളുടെ സൂക്ഷ്മപരിസ്ഥിതിയെ നിയന്ത്രിക്കുന്ന ഒരു ഇൻട്രാ സെല്ലുലാർ പ്രോട്ടോസോവാണ് ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഗോണ്ടി.ഈ പരാന്നഭോജി ലോക ജനസംഖ്യയുടെ ഏകദേശം 30% പേരെ ബാധിക്കുമെന്ന് കണക്കാക്കപ്പെടുന്നു, ഇത് മുഴുവൻ ജനങ്ങളെയും അപകടത്തിലാക്കുന്നു.ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഗോണ്ടിക്ക് കേന്ദ്ര നാഡീവ്യൂഹം (സിഎൻഎസ്) ഉൾപ്പെടെയുള്ള സുപ്രധാന അവയവങ്ങളെ ബാധിക്കുകയും മാരകമായ മെനിഞ്ചൈറ്റിസ്, എൻസെഫലൈറ്റിസ് തുടങ്ങിയ ഗുരുതരമായ രോഗങ്ങൾക്ക് കാരണമാകുകയും ചെയ്യും, പ്രത്യേകിച്ച് പ്രതിരോധശേഷി കുറഞ്ഞ രോഗികളിൽ.എന്നിരുന്നാലും, ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഗോണ്ടിക്ക് രോഗബാധിതരായ ആതിഥേയന്റെ പരിതസ്ഥിതിയിൽ മാറ്റം വരുത്താനും രോഗപ്രതിരോധ ശേഷിയില്ലാത്ത വ്യക്തികളിൽ കോശവളർച്ചയും രോഗപ്രതിരോധ പ്രതികരണങ്ങളും മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യാനും കഴിയും, ഇത് രോഗലക്ഷണങ്ങളില്ലാത്ത വിട്ടുമാറാത്ത അണുബാധയുടെ പരിപാലനത്തിലേക്ക് നയിക്കുന്നു.രസകരമെന്നു പറയട്ടെ, ടി. ഗോണ്ടിയുടെ വ്യാപനവും ബ്രെയിൻ ട്യൂമർ സംഭവങ്ങളും തമ്മിലുള്ള പരസ്പരബന്ധം കണക്കിലെടുക്കുമ്പോൾ, ചില റിപ്പോർട്ടുകൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത്, വിട്ടുമാറാത്ത ടി.
അയൽ കോശങ്ങളിൽ നിന്ന് പ്രോട്ടീനുകളും ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകളും ഉൾപ്പെടെയുള്ള ജീവശാസ്ത്രപരമായ ഉള്ളടക്കം എത്തിക്കുന്ന ഇന്റർസെല്ലുലാർ കമ്മ്യൂണിക്കേറ്ററുകൾ എന്നാണ് എക്സോസോമുകൾ അറിയപ്പെടുന്നത്16,17.ട്യൂമർ മൈക്രോ എൻവയോൺമെന്റിലെ ആന്റി-അപ്പോപ്റ്റോസിസ്, ആൻജിയോജെനിസിസ്, മെറ്റാസ്റ്റാസിസ് തുടങ്ങിയ ട്യൂമറുമായി ബന്ധപ്പെട്ട ജൈവ പ്രക്രിയകളെ എക്സോസോമുകൾക്ക് സ്വാധീനിക്കാൻ കഴിയും.പ്രത്യേകിച്ചും, 22 ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകൾ നീളമുള്ള ചെറിയ നോൺ-കോഡിംഗ് ആർഎൻഎകൾ, മൈആർഎൻഎ-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് സൈലൻസിങ് കോംപ്ലക്സ് (മിആർഎൻഎ) വഴി മനുഷ്യ എംആർഎൻഎയുടെ 30 ശതമാനത്തിലധികം നിയന്ത്രിക്കുന്ന പ്രധാനപ്പെട്ട പോസ്റ്റ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷനൽ ജീൻ റെഗുലേറ്ററുകളാണ്.രോഗബാധിതരായ ആതിഥേയരിൽ മൈആർഎൻഎ എക്സ്പ്രഷൻ നിയന്ത്രിക്കുന്നതിലൂടെ ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഗോണ്ടി ജൈവ പ്രക്രിയകളെ തടസ്സപ്പെടുത്തും.പരാന്നഭോജികളുടെ അതിജീവന തന്ത്രം കൈവരിക്കുന്നതിന് ഹോസ്റ്റ് ജൈവ പ്രക്രിയകളെ നിയന്ത്രിക്കുന്നതിനുള്ള പ്രധാന സിഗ്നലുകൾ ഹോസ്റ്റ് മൈആർഎൻഎകളിൽ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.അങ്ങനെ, T. gondii ബാധയേറ്റാൽ ഹോസ്റ്റ് miRNA പ്രൊഫൈലിലെ മാറ്റങ്ങൾ പഠിക്കുന്നത് ഹോസ്റ്റും T. gondiiയും തമ്മിലുള്ള പ്രതിപ്രവർത്തനം കൂടുതൽ വ്യക്തമായി മനസ്സിലാക്കാൻ നമ്മെ സഹായിക്കും.തീർച്ചയായും, തിരുജ്ഞാനം et al.ട്യൂമർ വളർച്ചയുമായി ബന്ധപ്പെട്ട പ്രത്യേക ആതിഥേയ മൈആർഎൻഎകളിലെ പ്രകടനത്തിൽ മാറ്റം വരുത്തിക്കൊണ്ട് ടി. ഗോണ്ടി ബ്രെയിൻ കാർസിനോജെനിസിസ് പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്നുവെന്ന് നിർദ്ദേശിച്ചു, കൂടാതെ പരീക്ഷണാത്മക മൃഗങ്ങളിൽ ടി.
ടോക്സോപ്ലാസ്മ ബിവി 2 ബാധിച്ച ആതിഥേയ മൈക്രോഗ്ലിയയിലെ എക്സോസോമൽ മിആർ-21 ന്റെ മാറ്റത്തിൽ ഈ പഠനം ശ്രദ്ധ കേന്ദ്രീകരിക്കുന്നു.FoxO1/p27 ന്റെ ന്യൂക്ലിയസിലെ നിലനിർത്തൽ കാരണം U87 ഗ്ലിയോമ സെല്ലുകളുടെ വളർച്ചയിൽ മാറ്റം വരുത്തിയ എക്സോസോമൽ miR-21 ന്റെ പങ്ക് ഞങ്ങൾ നിരീക്ഷിച്ചു, ഇത് അമിതമായി പ്രകടമാക്കിയ miR-21 ന്റെ ലക്ഷ്യമാണ്.
BV2-ൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ എക്സോസോമുകൾ ഡിഫറൻഷ്യൽ സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ ഉപയോഗിച്ച് നേടുകയും സെല്ലുലാർ ഘടകങ്ങളോ മറ്റ് വെസിക്കിളുകളോ ഉപയോഗിച്ച് മലിനീകരണം തടയുന്നതിന് വിവിധ രീതികൾ ഉപയോഗിച്ച് സാധൂകരിക്കുകയും ചെയ്തു.SDS-polyacrylamide ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് (SDS-PAGE) BV2 സെല്ലുകളിൽ നിന്നും എക്സോസോമുകളിൽ നിന്നും വേർതിരിച്ചെടുത്ത പ്രോട്ടീനുകൾക്കിടയിൽ വ്യത്യസ്തമായ പാറ്റേണുകൾ കാണിച്ചു (ചിത്രം 1A), കൂടാതെ അലിക്സിന്റെ സാന്നിധ്യത്തിനായി സാമ്പിളുകൾ വിലയിരുത്തി.അലിക്സ് ലേബലിംഗ് എക്സോസോം പ്രോട്ടീനുകളിൽ കണ്ടെത്തി എന്നാൽ BV2 സെൽ ലൈസേറ്റ് പ്രോട്ടീനുകളിൽ അല്ല (ചിത്രം 1B).കൂടാതെ, BV2 ൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ എക്സോസോമുകളിൽ നിന്നുള്ള ശുദ്ധീകരിച്ച RNA ഒരു ബയോ അനലൈസർ ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്തു.എക്സോസോമൽ RNA മൈഗ്രേഷൻ പാറ്റേണിൽ 18S, 28S റൈബോസോമൽ ഉപയൂണിറ്റുകൾ വളരെ അപൂർവമായി മാത്രമേ നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടിട്ടുള്ളൂ, ഇത് വിശ്വസനീയമായ ശുദ്ധതയെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു (ചിത്രം 1C).അവസാനമായി, ട്രാൻസ്മിഷൻ ഇലക്ട്രോൺ മൈക്രോസ്കോപ്പി കാണിച്ചു, നിരീക്ഷിച്ച എക്സോസോമുകൾക്ക് ഏകദേശം 60-150 nm വലിപ്പവും എക്സോസോം മോർഫോളജിക്ക് സമാനമായ ഒരു കപ്പ് പോലെയുള്ള ഘടനയുമുണ്ട് (ചിത്രം 1D).
BV2 സെല്ലുകളിൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ എക്സോസോമുകളുടെ സ്വഭാവം.(എ) സുരക്ഷാ ഡാറ്റ ഷീറ്റ് പേജ്.BV2 സെല്ലുകളിൽ നിന്നോ BV2 ൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ എക്സോസോമുകളിൽ നിന്നോ പ്രോട്ടീനുകൾ വേർതിരിച്ചെടുത്തു.കോശങ്ങളും എക്സോസോമുകളും തമ്മിൽ പ്രോട്ടീൻ പാറ്റേണുകൾ വ്യത്യാസപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.(ബി) ഒരു എക്സോസോമൽ മാർക്കറിന്റെ വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ട് വിശകലനം (അലിക്സ്).(C) ഒരു ബയോഅനലൈസർ ഉപയോഗിച്ച് BV2 സെല്ലുകളിൽ നിന്നും BV2 ഉരുത്തിരിഞ്ഞ എക്സോസോമുകളിൽ നിന്നും ശുദ്ധീകരിച്ച RNA യുടെ വിലയിരുത്തൽ.അങ്ങനെ, BV2 കോശങ്ങളിലെ 18S, 28S റൈബോസോമൽ ഉപയൂണിറ്റുകൾ എക്സോസോമൽ ആർഎൻഎയിൽ വളരെ അപൂർവമായി മാത്രമേ കണ്ടെത്തിയിട്ടുള്ളൂ.(ഡി) ട്രാൻസ്മിഷൻ ഇലക്ട്രോൺ മൈക്രോസ്കോപ്പി BV2 സെല്ലുകളിൽ നിന്ന് വേർതിരിച്ചെടുത്ത എക്സോസോമുകൾ 2% യുറേനൈൽ അസറ്റേറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് പ്രതികൂലമായി കളഞ്ഞതായി കാണിച്ചു.എക്സോസോമുകൾ ഏകദേശം 60-150 nm വലിപ്പവും കപ്പ് ആകൃതിയിലുള്ളതുമാണ് (സോംഗ് ആൻഡ് ജംഗ്, പ്രസിദ്ധീകരിക്കാത്ത ഡാറ്റ).
കൺഫോക്കൽ മൈക്രോസ്കോപ്പി ഉപയോഗിച്ച് U87 ഹ്യൂമൻ ഗ്ലിയോമ സെല്ലുകളിലേക്ക് BV2-ഉത്ഭവിച്ച എക്സോസോമുകളുടെ സെല്ലുലാർ ഇന്റേണലൈസേഷൻ നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടു.PKH26 ലേബൽ ചെയ്ത എക്സോസോമുകൾ U87 സെല്ലുകളുടെ സൈറ്റോപ്ലാസത്തിൽ പ്രാദേശികവൽക്കരിച്ചിരിക്കുന്നു.ന്യൂക്ലിയസുകളെ DAPI (ചിത്രം 2A) ഉപയോഗിച്ച് കളങ്കപ്പെടുത്തി, BV2-ഉത്പന്നമായ എക്സോസോമുകൾ ഹോസ്റ്റ് സെല്ലുകൾക്ക് ആന്തരികമാക്കാനും സ്വീകർത്താവിന്റെ കോശങ്ങളുടെ പരിസ്ഥിതിയെ സ്വാധീനിക്കാനും കഴിയുമെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു.
BV2-ഉത്പന്നമായ എക്സോസോമുകൾ U87 ഗ്ലിയോമ സെല്ലുകളിലേക്കും BV2-ഉത്ഭവിച്ച എക്സോസോമുകളിലേക്കും ടോക്സോപ്ലാസ്മ RH ബാധിച്ച U87 ഗ്ലിയോമ സെല്ലുകളുടെ വ്യാപനത്തിന് കാരണമാകുന്നു.(എ) കൺഫോക്കൽ മൈക്രോസ്കോപ്പി ഉപയോഗിച്ച് അളക്കുന്ന U87 സെല്ലുകളാൽ വിഴുങ്ങിയ എക്സോസോമുകൾ.U87 ഗ്ലിയോമ സെല്ലുകൾ PKH26 (ചുവപ്പ്) എന്ന് ലേബൽ ചെയ്ത എക്സോസോമുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു അല്ലെങ്കിൽ 24 മണിക്കൂർ നിയന്ത്രണമില്ലാതെ.ന്യൂക്ലിയസുകൾ DAPI (നീല) ഉപയോഗിച്ച് കറ പുരട്ടുകയും പിന്നീട് ഒരു കൺഫോക്കൽ മൈക്രോസ്കോപ്പിന് കീഴിൽ നിരീക്ഷിക്കുകയും ചെയ്തു (സ്കെയിൽ ബാർ: 10 μm, x 3000).(ബി) U87 ഗ്ലിയോമ സെൽ പ്രൊലിഫെറേഷൻ നിർണ്ണയിച്ചത് സെൽ പ്രൊലിഫെറേഷൻ അസ്സെ വഴിയാണ്.U87 ഗ്ലിയോമ സെല്ലുകൾ സൂചിപ്പിച്ച സമയത്തേക്ക് എക്സോസോമുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിച്ചു. *പി <0.05 വിദ്യാർത്ഥികളുടെ ടി ടെസ്റ്റിലൂടെ ലഭിച്ചു. *പി <0.05 വിദ്യാർത്ഥികളുടെ ടി ടെസ്റ്റിലൂടെ ലഭിച്ചു. *P <0,05 по t-критерию Стьюдента. *പി <0.05 വിദ്യാർത്ഥികളുടെ ടി-ടെസ്റ്റ് വഴി. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * പി <0,05, പൊലുഛെംന്ыയ് സ് പൊമൊശ്ഛ്ജു ടി-ക്രിതെരിഅ സ്ത്യ്യുദെംത. * പി <0.05 വിദ്യാർത്ഥികളുടെ ടി-ടെസ്റ്റ് ഉപയോഗിച്ച് ലഭിച്ചു.
U87 ഗ്ലിയോമ സെല്ലുകളിലേക്ക് BV2-ഉത്ഭവിച്ച എക്സോസോമുകളുടെ ആന്തരികവൽക്കരണം സ്ഥിരീകരിച്ചതിന് ശേഷം, മനുഷ്യ ഗ്ലിയോമ കോശങ്ങളുടെ വികസനത്തിൽ BV2-ഉത്പന്നമായ ടോക്സോപ്ലാസ്മ-ഉത്പന്ന എക്സോസോമുകളുടെ പങ്ക് അന്വേഷിക്കാൻ ഞങ്ങൾ സെൽ പ്രൊലിഫെറേഷൻ പരിശോധനകൾ നടത്തി.T. gondii-ബാധിച്ച BV2 കോശങ്ങളിൽ നിന്നുള്ള എക്സോസോമുകളുള്ള U87 കോശങ്ങളുടെ ചികിത്സ, നിയന്ത്രണവുമായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ T. gondii-ബാധിച്ച BV2-ഉത്പന്നമായ എക്സോസോമുകൾ U87 കോശങ്ങളുടെ ഗണ്യമായ വർദ്ധനവിന് കാരണമായതായി കാണിച്ചു (ചിത്രം. 2B).
കൂടാതെ, ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഉത്തേജിപ്പിച്ച എക്സോസോമുകൾ ഉയർന്ന തോതിലുള്ള വ്യാപനത്തിന് കാരണമായതിനാൽ U118 സെല്ലുകളുടെ വളർച്ചയ്ക്ക് U87 ന്റെ അതേ ഫലങ്ങൾ ഉണ്ടായിരുന്നു (ഡാറ്റ കാണിച്ചിട്ടില്ല).ഈ ഡാറ്റയെ അടിസ്ഥാനമാക്കി, ഗ്ലിയോമ സെൽ വ്യാപനത്തിൽ BV2-ഉത്ഭവിച്ച ടോക്സോപ്ലാസ്മ-ബാധിച്ച എക്സോസോമുകൾ ഒരു പ്രധാന പങ്ക് വഹിക്കുന്നുണ്ടെന്ന് നമുക്ക് സൂചിപ്പിക്കാൻ കഴിയും.
ട്യൂമർ ഡെവലപ്‌മെന്റിൽ ടോക്‌സോപ്ലാസ്മ-ബാധിച്ച BV2-ഉണ്ടാക്കിയ എക്‌സോസോമുകളുടെ സ്വാധീനം അന്വേഷിക്കാൻ, ഒരു സെനോഗ്രാഫ്റ്റ് മോഡലിനായി ഞങ്ങൾ U87 ഗ്ലിയോമ സെല്ലുകൾ നഗ്ന എലികളിലേക്ക് കുത്തിവയ്ക്കുകയും BV2-ഡിറൈവ്ഡ് എക്‌സോസോമുകൾ അല്ലെങ്കിൽ RH-ബാധിച്ച BV2-ഡിറൈവ്ഡ് എക്‌സോസോമുകൾ കുത്തിവയ്ക്കുകയും ചെയ്തു.1 ആഴ്‌ചയ്‌ക്ക് ശേഷം മുഴകൾ പ്രകടമായതിന് ശേഷം, 5 എലികളുള്ള ഓരോ പരീക്ഷണഗ്രൂപ്പിനെയും ട്യൂമർ വലുപ്പമനുസരിച്ച് വിഭജിച്ച് ഒരേ ആരംഭ പോയിന്റ് നിർണ്ണയിക്കുകയും ട്യൂമറിന്റെ വലുപ്പം 22 ദിവസത്തേക്ക് അളക്കുകയും ചെയ്തു.
U87 xenograft മോഡലുള്ള എലികളിൽ, BV2-ഉത്ഭവിച്ച RH-ബാധിച്ച എക്സോസോം ഗ്രൂപ്പിൽ 22-ാം ദിവസം (ചിത്രം 3A,B) ഗണ്യമായി വലിയ ട്യൂമർ വലിപ്പവും ഭാരവും നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടു.മറുവശത്ത്, എക്സോസോം ചികിത്സയ്ക്ക് ശേഷമുള്ള ബിവി 2-ഡിറൈവ്ഡ് എക്സോസോം ഗ്രൂപ്പും കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പും തമ്മിൽ ട്യൂമർ വലുപ്പത്തിൽ കാര്യമായ വ്യത്യാസമില്ല.കൂടാതെ, ഗ്ലിയോമ കോശങ്ങളും എക്സോസോമുകളും ഉപയോഗിച്ച് കുത്തിവച്ച എലികൾ RH- ബാധിച്ച BV2- ഡെറിവേഡ് എക്സോസോമുകളുടെ (ചിത്രം 3C) ഗ്രൂപ്പിലെ ഏറ്റവും വലിയ ട്യൂമർ വോള്യം ദൃശ്യപരമായി പ്രദർശിപ്പിച്ചു.BV2-ഉത്ഭവിച്ച ടോക്സോപ്ലാസ്മ-ബാധിച്ച എക്സോസോമുകൾ ഒരു മൗസ് ട്യൂമർ മോഡലിൽ ഗ്ലിയോമ വളർച്ചയെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നുവെന്ന് ഈ ഫലങ്ങൾ തെളിയിക്കുന്നു.
U87 xenograft മൗസ് മോഡലിൽ BV2-ഉത്ഭവിച്ച എക്സോസോമുകളുടെ ഓങ്കോജെനിസിസ് (AC).BV2-ൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ RH-ബാധിച്ച എക്സോസോമുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിക്കുന്ന BALB/c നഗ്ന എലികളിൽ ട്യൂമർ വലിപ്പവും (A) ഭാരവും (B) ഗണ്യമായി വർദ്ധിച്ചു.Matrigel മിശ്രിതത്തിൽ സസ്പെൻഡ് ചെയ്ത 1 x 107 U87 സെല്ലുകൾ ഉപയോഗിച്ച് BALB/c നഗ്ന എലികൾ (C) സബ്ക്യുട്ടേനിയസ് ആയി കുത്തിവച്ചു.കുത്തിവയ്പ്പിന് ആറ് ദിവസത്തിന് ശേഷം, എലികളിൽ 100 ​​μg BV2-ഉത്ഭവിച്ച എക്സോസോമുകൾ ചികിത്സിച്ചു.ട്യൂമറിന്റെ വലുപ്പവും ഭാരവും യഥാക്രമം സൂചിപ്പിച്ച ദിവസങ്ങളിലും യാഗത്തിന് ശേഷവും അളന്നു. *P <0.05. *P <0.05. *Р <0,05. *P <0.05. *പി <0.05. *പി <0.05. *Р <0,05. *P <0.05.
ടോക്സോപ്ലാസ്മ ആർഎച്ച് സ്ട്രെയിൻ (ചിത്രം 4 എ) അണുബാധയ്ക്ക് ശേഷം മൈക്രോഗ്ലിയയിൽ പ്രതിരോധശേഷി അല്ലെങ്കിൽ ട്യൂമർ വികസനവുമായി ബന്ധപ്പെട്ട 37 മൈആർഎൻഎകൾ (16 ഓവർ എക്സ്പ്രെസ്ഡ്, 21 ഡൗൺ എക്സ്പ്രസ്ഡ്) ഡാറ്റ കാണിച്ചു.BV2, BV2, U87 സെല്ലുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിച്ച എക്സോസോമുകൾ എന്നിവയിൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ എക്സോസോമുകളിലെ തത്സമയ RT-PCR വഴി, മാറ്റം വരുത്തിയ miRNA-കൾക്കിടയിൽ miR-21-ന്റെ ആപേക്ഷിക എക്സ്പ്രഷൻ ലെവലുകൾ സ്ഥിരീകരിച്ചു.ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഗോണ്ടി (RH സ്ട്രെയിൻ) ബാധിച്ച BV2 കോശങ്ങളിൽ നിന്നുള്ള എക്സോസോമുകളിൽ ഗണ്യമായ വർദ്ധനവ് miR-21 ന്റെ എക്സ്പ്രഷൻ കാണിച്ചു (ചിത്രം 4B).മാറ്റം വരുത്തിയ എക്സോസോമുകൾ (ചിത്രം 4B) സ്വീകരിച്ചതിന് ശേഷം BV2, U87 സെല്ലുകളിലെ miR-21 ന്റെ ആപേക്ഷിക എക്സ്പ്രഷൻ ലെവലുകൾ വർദ്ധിച്ചു.ട്യൂമർ രോഗികളുടെയും ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഗോണ്ടി (ME49 സ്ട്രെയിൻ) ബാധിച്ച എലികളുടെയും മസ്തിഷ്ക കോശങ്ങളിലെ miR-21 എക്സ്പ്രഷന്റെ ആപേക്ഷിക അളവ് യഥാക്രമം നിയന്ത്രണങ്ങളേക്കാൾ കൂടുതലാണ് (ചിത്രം 4C).ഈ ഫലങ്ങൾ വിട്രോയിലും വിവോയിലും പ്രവചിച്ചതും സ്ഥിരീകരിച്ചതുമായ മൈക്രോആർഎൻഎകളുടെ എക്സ്പ്രഷൻ ലെവലുകൾ തമ്മിലുള്ള വ്യത്യാസങ്ങളുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.
ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഗോണ്ടി (RH) ബാധിച്ച മൈക്രോഗ്ലിയയിലെ എക്സോസോമൽ miP-21a-5p ന്റെ പ്രകടനത്തിലെ മാറ്റങ്ങൾ.(A) T. gondii RH അണുബാധയെ തുടർന്നുള്ള പ്രതിരോധശേഷി അല്ലെങ്കിൽ ട്യൂമർ വികസനവുമായി ബന്ധപ്പെട്ട siRNA യിൽ കാര്യമായ മാറ്റങ്ങൾ പ്രകടമാക്കുന്നു.(B) BV2-ഡിറൈവ്ഡ് എക്സോസോമുകൾ, BV2-ട്രീറ്റ് ചെയ്ത എക്സോസോമുകൾ, U87 സെല്ലുകൾ എന്നിവയിൽ തത്സമയ RT-PCR വഴി ആപേക്ഷിക miR-21 എക്സ്പ്രഷൻ ലെവലുകൾ കണ്ടെത്തി.(C) ട്യൂമർ രോഗികളുടെയും (N=3) ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഗോണ്ടി (ME49 സ്ട്രെയിൻ) ബാധിച്ച എലികളുടെയും മസ്തിഷ്ക കോശങ്ങളിൽ ആപേക്ഷിക miR-21 എക്സ്പ്രഷൻ ലെവലുകൾ കണ്ടെത്തി (N=3). *പി <0.05 വിദ്യാർത്ഥികളുടെ ടി ടെസ്റ്റിലൂടെ ലഭിച്ചു. *പി <0.05 വിദ്യാർത്ഥികളുടെ ടി ടെസ്റ്റിലൂടെ ലഭിച്ചു. *P <0,05 ബ്ыലോ പോലുചെനോ സ് പോമോഷു ടി-ക്രിറ്റീരിയ സ്റ്റുഡൻറ്. വിദ്യാർത്ഥികളുടെ ടി-ടെസ്റ്റ് ഉപയോഗിച്ചാണ് *P <0.05 ലഭിച്ചത്. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * പി <0,05, പൊലുഛെംന്ыയ് സ് പൊമൊശ്ഛ്ജു ടി-ക്രിതെരിഅ സ്റ്റുഡൻറ്. * പി <0.05 വിദ്യാർത്ഥികളുടെ ടി-ടെസ്റ്റ് ഉപയോഗിച്ച് ലഭിച്ചു.
ആർഎച്ച്-ബാധിച്ച ബിവി2 സെല്ലുകളിൽ നിന്നുള്ള എക്സോസോമുകൾ വിവോയിലും വിട്രോയിലും ഗ്ലിയോമസിന്റെ വളർച്ചയിലേക്ക് നയിച്ചു (ചിത്രം 2, 3).പ്രസക്തമായ mRNA-കൾ കണ്ടെത്തുന്നതിന്, BV2 അല്ലെങ്കിൽ RH BV2-ൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ എക്സോസോമുകൾ ബാധിച്ച U87 സെല്ലുകളിലെ ആന്റിട്യൂമർ ടാർഗെറ്റ് ജീനുകളുടെ mRNA അളവ്, ഫോർക്ക്‌ഹെഡ് ബോക്സ് O1 (FoxO1), PTEN, പ്രോഗ്രാം ചെയ്ത സെൽ ഡെത്ത് 4 (PDCD4) എന്നിവ ഞങ്ങൾ പരിശോധിച്ചു.FoxO1, PTEN, PDCD4 ജീനുകൾ ഉൾപ്പെടെ ട്യൂമറുമായി ബന്ധപ്പെട്ട നിരവധി ജീനുകൾക്ക് miR-2121,22 ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റുകൾ ഉണ്ടെന്ന് ബയോ ഇൻഫോർമാറ്റിക്സ് വിശകലനം തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്.BV2-ഉത്ഭവിച്ച എക്സോസോമുകളെ അപേക്ഷിച്ച് RH-ബാധിച്ച BV2-ഉത്പന്ന എക്സോസോമുകളിൽ ആന്റിട്യൂമർ ടാർഗെറ്റ് ജീനുകളുടെ mRNA അളവ് കുറഞ്ഞു (ചിത്രം 5A).BV2-ഉത്ഭവിച്ച എക്സോസോമുകളെ അപേക്ഷിച്ച് RH-ബാധിച്ച BV2-ഉത്പന്ന എക്സോസോമുകളിൽ FoxO1 പ്രോട്ടീൻ അളവ് കുറച്ചതായി കാണിച്ചു (ചിത്രം 5B).ഈ ഫലങ്ങളെ അടിസ്ഥാനമാക്കി, ആർഎച്ച്-ബാധിച്ച BV2-ൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ എക്സോസോമുകൾ, ട്യൂമർ വളർച്ചയിൽ അവയുടെ പങ്ക് നിലനിർത്തിക്കൊണ്ട്, ആൻറി-ഓങ്കോജെനിക് ജീനുകളെ നിയന്ത്രിച്ച് നിർത്തുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങൾക്ക് സ്ഥിരീകരിക്കാൻ കഴിയും.
ടോക്സോപ്ലാസ്മ RH-ബാധിച്ച BV2-ഉത്ഭവിച്ച എക്സോസോമുകൾ U87 ഗ്ലിയോമ കോശങ്ങളിലെ ആന്റിട്യൂമർ ജീനുകളെ ടോക്സോപ്ലാസ്മ RH-ബാധിച്ച BV2-ഉത്പന്ന എക്സോസോമുകൾ അടിച്ചമർത്താൻ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നു.(A) PBS എക്സോസോമുകളെ അപേക്ഷിച്ച് T. gondii RH-infected BV2-ൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ എക്സോസോമുകളിലെ FoxO1, PTEN, PDCD4 എക്സ്പ്രഷനുകളുടെ തത്സമയ PCR.β-actin mRNA ഒരു നിയന്ത്രണമായി ഉപയോഗിച്ചു.(B) FoxO1 എക്സ്പ്രഷൻ വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗ് വഴി നിർണ്ണയിച്ചു, കൂടാതെ ഇമേജ്ജെ പ്രോഗ്രാം ഉപയോഗിച്ച് ഡെൻസിറ്റോമെട്രി ഡാറ്റ സ്ഥിതിവിവരക്കണക്ക് വിലയിരുത്തി. *പി <0.05 വിദ്യാർത്ഥികളുടെ ടി ടെസ്റ്റിലൂടെ ലഭിച്ചു. *പി <0.05 വിദ്യാർത്ഥികളുടെ ടി ടെസ്റ്റിലൂടെ ലഭിച്ചു. *P <0,05 ബ്ыലോ പോലുചെനോ സ് പോമോഷു ടി-ക്രിറ്റീരിയ സ്റ്റുഡൻറ്. വിദ്യാർത്ഥികളുടെ ടി-ടെസ്റ്റ് ഉപയോഗിച്ചാണ് *P <0.05 ലഭിച്ചത്. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * പി <0,05, പൊലുഛെംന്ыയ് സ് പൊമൊശ്ഛ്ജു ടി-ക്രിതെരിഅ സ്റ്റുഡൻറ്. * പി <0.05 വിദ്യാർത്ഥികളുടെ ടി-ടെസ്റ്റ് ഉപയോഗിച്ച് ലഭിച്ചു.
ട്യൂമർ-അസോസിയേറ്റഡ് ജീൻ റെഗുലേഷനിൽ എക്സോസോമുകളിൽ miP-21 ന്റെ പ്രഭാവം മനസ്സിലാക്കാൻ, Lipofectamine 2000 ഉപയോഗിച്ച് U87 കോശങ്ങൾ miP-21 ന്റെ ഒരു ഇൻഹിബിറ്റർ ഉപയോഗിച്ച് കൈമാറ്റം ചെയ്യുകയും 24 മണിക്കൂറിന് ശേഷം കോശങ്ങൾ ശേഖരിക്കുകയും ചെയ്തു.miR-21 ഇൻഹിബിറ്ററുകൾ ഉപയോഗിച്ച് കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെട്ട സെല്ലുകളിലെ FoxO1, p27 എക്സ്പ്രഷൻ ലെവലുകൾ qRT-PCR (ചിത്രം 6A,B) ഉപയോഗിച്ച് BV2-ഉത്ഭവിച്ച എക്സോസോമുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിക്കുന്ന സെല്ലുകളുമായി താരതമ്യം ചെയ്തു.U87 സെല്ലുകളിലേക്ക് miR-21 ഇൻഹിബിറ്ററിന്റെ കൈമാറ്റം FoxO1, p27 എക്സ്പ്രഷൻ (FIG. 6) എന്നിവയെ ഗണ്യമായി കുറച്ചു.
RH-ബാധിച്ച എക്സോസോമൽ BV2-ഡെറൈവ്ഡ് miP-21, U87 ഗ്ലിയോമ സെല്ലുകളിൽ FoxO1/p27 എക്സ്പ്രഷൻ മാറ്റി.Lipofectamine 2000 ഉപയോഗിച്ച് U87 സെല്ലുകൾ miP-21 ഇൻഹിബിറ്റർ ഉപയോഗിച്ച് കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെടുകയും 24 മണിക്കൂറിന് ശേഷം കോശങ്ങൾ ശേഖരിക്കുകയും ചെയ്തു.miR-21 ഇൻഹിബിറ്ററുകൾ ഉപയോഗിച്ച് കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെട്ട സെല്ലുകളിലെ FoxO1, p27 എക്സ്പ്രഷൻ ലെവലുകൾ qRT-PCR (A, B) ഉപയോഗിച്ച് BV2-ഡൈരൈവ്ഡ് എക്സോസോമുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിക്കുന്ന സെല്ലുകളിലെ ലെവലുകളുമായി താരതമ്യം ചെയ്തു.
ഹോസ്റ്റിന്റെ രോഗപ്രതിരോധ പ്രതികരണത്തിൽ നിന്ന് രക്ഷപ്പെടാൻ, ടോക്സോപ്ലാസ്മ പരാന്നഭോജി ഒരു ടിഷ്യു സിസ്റ്റായി മാറുന്നു.അവ ആതിഥേയന്റെ ജീവിതകാലം മുഴുവൻ തലച്ചോറ്, ഹൃദയം, എല്ലിൻറെ പേശികൾ എന്നിവയുൾപ്പെടെ വിവിധ കോശങ്ങളെ പരാദമാക്കുകയും ആതിഥേയന്റെ രോഗപ്രതിരോധ പ്രതികരണത്തെ മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യുകയും ചെയ്യുന്നു.കൂടാതെ, അവയ്ക്ക് ആതിഥേയ കോശങ്ങളുടെ കോശ ചക്രവും അപ്പോപ്‌ടോസിസും നിയന്ത്രിക്കാനും അവയുടെ വ്യാപനം പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കാനും കഴിയും14,24.ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഗോണ്ടി പ്രധാനമായും ആതിഥേയ ഡെൻഡ്രിറ്റിക് കോശങ്ങൾ, ന്യൂട്രോഫുകൾ, മസ്തിഷ്ക മൈക്രോഗ്ലിയ ഉൾപ്പെടെയുള്ള മോണോസൈറ്റ്/മാക്രോഫേജ് ലൈനേജ് എന്നിവയെ ബാധിക്കുന്നു.ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഗോണ്ടി M2 ഫിനോടൈപ്പിന്റെ മാക്രോഫേജുകളുടെ വ്യത്യാസത്തെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നു, രോഗകാരി അണുബാധയ്ക്ക് ശേഷമുള്ള മുറിവ് ഉണക്കുന്നതിനെ ബാധിക്കുന്നു, കൂടാതെ ഹൈപ്പർവാസ്കുലറൈസേഷൻ, ഗ്രാനുലോമാറ്റസ് ഫൈബ്രോസിസ് എന്നിവയുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.ടോക്സോപ്ലാസ്മ അണുബാധയുടെ ഈ പെരുമാറ്റ രോഗനിർണയം ട്യൂമർ വികസനവുമായി ബന്ധപ്പെട്ട മാർക്കറുകളുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കാം.ടോക്സോപ്ലാസ്മ നിയന്ത്രിക്കുന്ന ശത്രുതാപരമായ അന്തരീക്ഷം അനുബന്ധ പ്രീകാൻസറിനോട് സാമ്യമുള്ളതാകാം.അതിനാൽ, ടോക്സോപ്ലാസ്മ അണുബാധ മസ്തിഷ്ക മുഴകളുടെ വികാസത്തിന് കാരണമാകുമെന്ന് അനുമാനിക്കാം.വാസ്തവത്തിൽ, വിവിധ ബ്രെയിൻ ട്യൂമറുകളുള്ള രോഗികളുടെ സെറത്തിൽ ടോക്സോപ്ലാസ്മ അണുബാധയുടെ ഉയർന്ന നിരക്ക് റിപ്പോർട്ട് ചെയ്യപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്.കൂടാതെ, ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഗോണ്ടി മറ്റൊരു കാർസിനോജെനിക് ഇഫക്റ്ററായിരിക്കാം കൂടാതെ മറ്റ് സാംക്രമിക കാർസിനോജനുകളെ ബ്രെയിൻ ട്യൂമറുകൾ വികസിപ്പിക്കാൻ സഹായിക്കുന്നതിന് സഹകരിച്ച് പ്രവർത്തിക്കുന്നു.ഇക്കാര്യത്തിൽ, പി.
കാൻസർ ഗവേഷണ മേഖലയിൽ എക്സോസോമുകളുടെ നിയന്ത്രകരുടെ പങ്ക് വിപുലമായി അന്വേഷിക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്.എന്നിരുന്നാലും, പരാന്നഭോജികൾക്കും രോഗബാധിതരായ ആതിഥേയർക്കും ഇടയിലുള്ള എക്സോസോമുകളുടെ പങ്ക് കൃത്യമായി മനസ്സിലാക്കപ്പെട്ടിട്ടില്ല.ഇതുവരെ, സ്രവിക്കുന്ന പ്രോട്ടീനുകൾ ഉൾപ്പെടെയുള്ള വിവിധ റെഗുലേറ്റർമാർ, പ്രോട്ടോസോവൻ പരാന്നഭോജികൾ ആതിഥേയ ആക്രമണത്തെ പ്രതിരോധിക്കുകയും അണുബാധയെ ശാശ്വതമാക്കുകയും ചെയ്യുന്ന ജൈവ പ്രക്രിയകളെക്കുറിച്ച് വിശദീകരിച്ചിട്ടുണ്ട്.പ്രോട്ടോസോവയുമായി ബന്ധപ്പെട്ട മൈക്രോവെസിക്കിളുകളും അവയുടെ മൈക്രോആർഎൻഎകളും ഹോസ്റ്റ് സെല്ലുകളുമായി ഇടപഴകുകയും അവയുടെ നിലനിൽപ്പിന് അനുകൂലമായ അന്തരീക്ഷം സൃഷ്ടിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു എന്ന ആശയം അടുത്തിടെ വളർന്നുവരുന്നു.അതിനാൽ, മാറ്റം വരുത്തിയ എക്സോസോമൽ മൈആർഎൻഎകളും ഗ്ലിയോമ സെൽ പ്രൊലിഫെറേഷനും തമ്മിലുള്ള ബന്ധം കണ്ടെത്തുന്നതിന് കൂടുതൽ പഠനങ്ങൾ ആവശ്യമാണ്.മൈക്രോആർഎൻഎ മാറ്റം (ക്ലസ്റ്റർ ജീനുകൾ miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1, miR-17-92) ടോക്സോപ്ലാസ്മ ബാധിച്ച ഹ്യൂമൻ മാക്രോഫേജുകളിലെ STAT3 പ്രൊമോട്ടറുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നു, ഇത് നിയന്ത്രിക്കപ്പെടുകയും പ്രേരിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഗോണ്ടി അണുബാധയ്ക്കുള്ള പ്രതികരണമായി അപ്പോപ്റ്റോസിസ് 29 .ടോക്സോപ്ലാസ്മ അണുബാധ miR-17-5p, miR-106b-5p എന്നിവയുടെ പ്രകടനത്തെ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു, അവ പല ഹൈപ്പർപ്രൊലിഫെറേറ്റീവ് രോഗങ്ങളുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.ടോക്സോപ്ലാസ്മ അണുബാധ നിയന്ത്രിക്കുന്ന ഹോസ്റ്റ് മൈആർഎൻഎകൾ പരാന്നഭോജികളുടെ അതിജീവനത്തിനും ആതിഥേയ ജീവശാസ്ത്രപരമായ പെരുമാറ്റത്തിലെ രോഗകാരികൾക്കും പ്രധാന തന്മാത്രകളാണെന്ന് ഈ ഡാറ്റ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.
ഗ്ലിയോമാസ് ഉൾപ്പെടെയുള്ള മാരകമായ കോശങ്ങളുടെ തുടക്കത്തിലും പുരോഗതിയിലും മാറ്റം വരുത്തിയ മൈആർഎൻഎകൾക്ക് വിവിധ തരത്തിലുള്ള പെരുമാറ്റങ്ങളെ സ്വാധീനിക്കാൻ കഴിയും: വളർച്ചാ സിഗ്നലുകളുടെ സ്വയംപര്യാപ്തത, വളർച്ചയെ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്ന സിഗ്നലുകളോടുള്ള സംവേദനക്ഷമത, അപ്പോപ്റ്റോസിസ് ഒഴിവാക്കൽ, പരിധിയില്ലാത്ത അനുകരണ ശേഷി, ആൻജിയോജെനിസിസ്, അധിനിവേശം, മെറ്റാസ്റ്റാസിസ്, വീക്കം.ഗ്ലിയോമയിൽ, നിരവധി എക്സ്പ്രഷൻ പ്രൊഫൈലിംഗ് പഠനങ്ങളിൽ മാറ്റം വരുത്തിയ മൈആർഎൻഎകൾ തിരിച്ചറിഞ്ഞിട്ടുണ്ട്.
നിലവിലെ പഠനത്തിൽ, ടോക്സോപ്ലാസ്മ ബാധിച്ച ഹോസ്റ്റ് സെല്ലുകളിൽ ഉയർന്ന അളവിലുള്ള miRNA-21 എക്സ്പ്രഷൻ ഞങ്ങൾ സ്ഥിരീകരിച്ചു.miR-21, ഗ്ലിയോമാസ്, 33 ഉൾപ്പെടെയുള്ള ഖര ട്യൂമറുകളിൽ പതിവായി അമിതമായി പ്രകടമാകുന്ന മൈക്രോആർഎൻഎകളിൽ ഒന്നായി തിരിച്ചറിഞ്ഞിട്ടുണ്ട്, കൂടാതെ അതിന്റെ പദപ്രയോഗം ഗ്ലിയോമയുടെ ഗ്രേഡുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.ഗ്ലിയോമയുടെ വളർച്ചയിൽ ആന്റി-അപ്പോപ്റ്റോട്ടിക് ഘടകമായി വർത്തിക്കുന്ന ഒരു നോവൽ ഓങ്കോജീനാണ് miR-21 എന്ന് ശേഖരിക്കുന്ന തെളിവുകൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു, ഇത് ടിഷ്യൂകളിലും പ്ലാസ്മയിലും മനുഷ്യ മസ്തിഷ്ക മാരകമായ വൈകല്യങ്ങളുടെ അമിതമായി പീഡിപ്പിക്കപ്പെടുന്നു.രസകരമെന്നു പറയട്ടെ, ഗ്ലിയോമ കോശങ്ങളിലെയും ടിഷ്യൂകളിലെയും miR-21 നിർജ്ജീവമാക്കുന്നത് കാസ്‌പേസ്-ആശ്രിത അപ്പോപ്റ്റോസിസ് കാരണം കോശങ്ങളുടെ വ്യാപനത്തെ തടയുന്നു.miR-21 പ്രവചിച്ച ലക്ഷ്യങ്ങളുടെ ബയോ ഇൻഫോർമാറ്റിക് വിശകലനം, miR-2121 ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റിനൊപ്പം പ്രോഗ്രാം ചെയ്ത സെൽ ഡെത്ത് 4 (PDCD4), ട്രോപോമിയോസിൻ (TPM1), PTEN, ഫോർക്ക്‌ഹെഡ് ബോക്സ് O1 (FoxO1) എന്നിവയുൾപ്പെടെ അപ്പോപ്‌ടോസിസ് പാതകളുമായി ബന്ധപ്പെട്ട ഒന്നിലധികം ട്യൂമർ സപ്രസ്സർ ജീനുകൾ വെളിപ്പെടുത്തി..22.38.
ട്രാൻസ്‌ക്രിപ്ഷൻ ഘടകങ്ങളിലൊന്നായി (FoxO) ഫോക്‌സ് ഒ 1, വിവിധ തരം ഹ്യൂമൻ ക്യാൻസർ വികസിപ്പിക്കുന്നതിൽ ഉൾപ്പെടുന്നു, കൂടാതെ ട്യൂമർ സപ്രസ്സർ ജീനുകളായ p21, p27, Bim, FasL40 എന്നിവയുടെ പ്രകടനത്തെ നിയന്ത്രിക്കാനും കഴിയും.കോശവളർച്ചയെ അടിച്ചമർത്താൻ P27 പോലുള്ള സെൽ സൈക്കിൾ ഇൻഹിബിറ്ററുകളെ ബന്ധിപ്പിക്കാനും സജീവമാക്കാനും FoxO1-ന് കഴിയും.കൂടാതെ, FoxO1 PI3K/Akt സിഗ്നലിംഗിന്റെ ഒരു പ്രധാന ഇഫക്റ്ററാണ് കൂടാതെ p2742 ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ സജീവമാക്കുന്നതിലൂടെ സെൽ സൈക്കിൾ പുരോഗതിയും കോശ വ്യത്യാസവും പോലുള്ള നിരവധി ജൈവ പ്രക്രിയകളെ നിയന്ത്രിക്കുന്നു.
ഉപസംഹാരമായി, ടോക്സോപ്ലാസ്മ ബാധിച്ച മൈക്രോഗ്ലിയയിൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ എക്സോസോമൽ miR-21 ഗ്ലിയോമ കോശങ്ങളുടെ വളർച്ചാ റെഗുലേറ്റർ എന്ന നിലയിൽ ഒരു പ്രധാന പങ്ക് വഹിക്കുമെന്ന് ഞങ്ങൾ വിശ്വസിക്കുന്നു (ചിത്രം 7).എന്നിരുന്നാലും, എക്സോസോമൽ miR-21, മാറ്റം വരുത്തിയ ടോക്സോപ്ലാസ്മ അണുബാധ, ഗ്ലിയോമ വളർച്ച എന്നിവ തമ്മിലുള്ള നേരിട്ടുള്ള ബന്ധം കണ്ടെത്താൻ കൂടുതൽ പഠനങ്ങൾ ആവശ്യമാണ്.ഈ ഫലങ്ങൾ ടോക്സോപ്ലാസ്മ അണുബാധയും ഗ്ലിയോമയുടെ സംഭവവും തമ്മിലുള്ള ബന്ധം പഠിക്കുന്നതിനുള്ള ഒരു ആരംഭ പോയിന്റ് നൽകുമെന്ന് പ്രതീക്ഷിക്കുന്നു.
ഗ്ലിയോമ (മസ്തിഷ്കം) കാർസിനോജെനിസിസ് മെക്കാനിസത്തിന്റെ ഒരു സ്കീമാറ്റിക് ഡയഗ്രം ഈ പഠനത്തിൽ നിർദ്ദേശിക്കപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.രചയിതാവ് PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA) വരയ്ക്കുന്നു.
മൃഗങ്ങളുടെ ഉപയോഗം ഉൾപ്പെടെയുള്ള ഈ പഠനത്തിലെ എല്ലാ പരീക്ഷണാത്മക പ്രോട്ടോക്കോളുകളും സിയോൾ നാഷണൽ യൂണിവേഴ്സിറ്റി അനിമൽ കെയർ ആൻഡ് യൂസർ കമ്മിറ്റി സ്റ്റാൻഡേർഡ് എത്തിക്കൽ മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശങ്ങൾക്കനുസൃതമായിരുന്നു, കൂടാതെ സിയോൾ നാഷണൽ യൂണിവേഴ്സിറ്റി സ്കൂൾ ഓഫ് മെഡിസിൻ (IRB നമ്പർ SNU- യുടെ ഇൻസ്റ്റിറ്റ്യൂഷണൽ റിവ്യൂ ബോർഡ്) 150715).-2).എല്ലാ പരീക്ഷണ നടപടിക്രമങ്ങളും ARRIVE ശുപാർശകൾക്കനുസൃതമായി നടപ്പിലാക്കി.
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM; Welgene, Seoul, Korea), Roswell Park Memorial Institute's Medium (RPMI; Welgene) എന്നിവയിൽ BV2 മൗസ് മൈക്രോഗ്ലിയയും U87 ഹ്യൂമൻ ഗ്ലിയോമ സെല്ലുകളും യഥാക്രമം 10% ഗര്ഭപിണ്ഡമുള്ള ബോവിന് സെറം, 4 മി.മീ. ഗ്ലൂട്ടാമിൻ, 0.2 എംഎം പെൻസിലിൻ, 0.05 എംഎം സ്ട്രെപ്റ്റോമൈസിൻ.37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 5% CO2 ഉള്ള ഒരു ഇൻകുബേറ്ററിൽ കോശങ്ങൾ സംസ്ക്കരിച്ചു.മറ്റൊരു ഗ്ലിയോമ സെൽ ലൈൻ, U118, U87 സെല്ലുകളുമായി താരതമ്യം ചെയ്യാൻ ഉപയോഗിച്ചു.
T. gondii-ബാധിച്ച RH, ME49 സ്‌ട്രെയിനുകളിൽ നിന്ന് എക്സോസോമുകൾ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ, 3-4 ദിവസം മുമ്പ് കുത്തിവച്ച 6 ആഴ്ച പ്രായമുള്ള BALB/c എലികളുടെ വയറിലെ അറയിൽ നിന്ന് T. gondii tachyzoites (RH സ്ട്രെയിൻ) വിളവെടുത്തു.40% പെർകോളിൽ (സിഗ്മ-ആൽഡ്രിച്ച്, സെന്റ്. ലൂയിസ്, MO, USA)43-ൽ ടാക്കിസോയിറ്റുകൾ പിബിഎസ് ഉപയോഗിച്ച് മൂന്ന് തവണ കഴുകുകയും സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ വഴി ശുദ്ധീകരിക്കുകയും ചെയ്തു.ME49 സ്‌ട്രെയിനിന്റെ ടാക്കിസോയിറ്റുകൾ ലഭിക്കുന്നതിന്, BALB/c എലികൾക്ക് 20 ടിഷ്യൂ സിസ്റ്റുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ഇൻട്രാപെറിറ്റോണായി കുത്തിവയ്‌ക്കുകയും അണുബാധയ്ക്ക് (PI) ശേഷം 6-8-ാം ദിവസം വയറിലെ അറ കഴുകി സിസ്റ്റുകളിലെ ടാക്കിസോയിറ്റ് രൂപാന്തരം ശേഖരിക്കുകയും ചെയ്തു.പിബിഎസ് ബാധിച്ച എലികൾ.100 μg/ml പെൻസിലിൻ (Gibco/BRL, Grand Island, NY, USA), 100 μg/ml സ്ട്രെപ്റ്റോമൈസിൻ (Gibco/BRL), 5% ഗര്ഭപിണ്ഡമുള്ള ബോവിന് സെറം (ലോന്സ, വാല്കെര്സ്) ​​എന്നിവയ്ക്കൊപ്പം ചേര്ന്ന കോശങ്ങളിലാണ് ME49 ടാക്കിസോയിറ്റുകള് വളരുന്നത്. .., യുഎസ്എ) 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിലും 5% കാർബൺ ഡൈ ഓക്സൈഡിലും.വെറോ സെല്ലുകളിൽ കൃഷി ചെയ്ത ശേഷം, ME49 ടാക്കിസോയിറ്റുകൾ 25 ഗേജ് സൂചിയിലൂടെയും പിന്നീട് 5 µm ഫിൽട്ടറിലൂടെയും അവശിഷ്ടങ്ങളും കോശങ്ങളും നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി രണ്ട് തവണ കടത്തിവിട്ടു.കഴുകിയ ശേഷം, ടാക്കിസോയിറ്റുകൾ PBS44-ൽ പുനഃസ്ഥാപിച്ചു.രോഗബാധിതരായ C57BL/6 എലികളുടെ (ഓറിയന്റ് ബയോ അനിമൽ സെന്റർ, സിയോങ്നാം, കൊറിയ) തലച്ചോറിൽ നിന്ന് വേർതിരിച്ചെടുത്ത സിസ്റ്റുകളുടെ ഇൻട്രാപെരിറ്റോണിയൽ കുത്തിവയ്പ്പിലൂടെയാണ് ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഗോണ്ടി സ്‌ട്രെയിൻ ME49 ന്റെ ടിഷ്യൂ സിസ്റ്റുകൾ നിലനിർത്തുന്നത്.ME49 ബാധിച്ച എലികളുടെ മസ്തിഷ്കം PI യുടെ 3 മാസത്തിനുശേഷം വിളവെടുക്കുകയും സിസ്റ്റുകൾ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ മൈക്രോസ്കോപ്പിന് കീഴിൽ അരിഞ്ഞെടുക്കുകയും ചെയ്തു.രോഗബാധിതരായ എലികളെ സിയോൾ നാഷണൽ യൂണിവേഴ്സിറ്റി സ്കൂൾ ഓഫ് മെഡിസിനിൽ പ്രത്യേക രോഗകാരികളില്ലാത്ത അവസ്ഥയിൽ (SPF) സൂക്ഷിച്ചു.
നിർമ്മാതാവിന്റെ നിർദ്ദേശങ്ങൾ അനുസരിച്ച്, എല്യൂഷൻ സ്റ്റെപ്പിനുള്ള ഇൻകുബേഷൻ സമയം ഉൾപ്പെടെ, miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) ഉപയോഗിച്ച് BV2-ഉത്ഭവിച്ച എക്സോസോമുകൾ, BV2 സെല്ലുകൾ, ടിഷ്യൂകൾ എന്നിവയിൽ നിന്ന് മൊത്തം RNA വേർതിരിച്ചെടുത്തു.നാനോഡ്രോപ്പ് 2000 സ്പെക്‌ട്രോഫോട്ടോമീറ്ററിലാണ് ആർഎൻഎ സാന്ദ്രത നിർണ്ണയിച്ചത്.എജിലന്റ് 2100 ബയോ അനലൈസർ (എജിലന്റ് ടെക്‌നോളജീസ്, ആംസ്റ്റൽവീൻ, നെതർലാൻഡ്‌സ്) ഉപയോഗിച്ചാണ് ആർഎൻഎ മൈക്രോഅറേകളുടെ ഗുണനിലവാരം വിലയിരുത്തിയത്.
10% exosome-poor FBS ഉള്ള DMEM, 100,000g അൾട്രാസെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ വഴി 16 മണിക്കൂർ 4°C-ൽ തയ്യാറാക്കി, 0.22 µm ഫിൽട്ടറിലൂടെ ഫിൽട്ടർ ചെയ്തു (Nalgene, Rochester, NY, USA).BV2 സെല്ലുകൾ, 5 × 105, DMEM-ൽ 10% എക്സോസോം-ഡീപ്ലീറ്റഡ് FBS ഉം 1% ആൻറിബയോട്ടിക്കുകളും 37°C, 5% CO2 എന്നിവയിൽ സംസ്ക്കരിച്ചിരിക്കുന്നു.24 മണിക്കൂർ ഇൻകുബേഷനു ശേഷം, സ്ട്രെയിൻ RH അല്ലെങ്കിൽ ME49 (MOI = 10) എന്ന ടാക്കിസോയിറ്റുകൾ സെല്ലുകളിൽ ചേർക്കുകയും ആക്രമണം നടത്താത്ത പരാദങ്ങളെ ഒരു മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ നീക്കം ചെയ്യുകയും DMEM ഉപയോഗിച്ച് വീണ്ടും നിറയ്ക്കുകയും ചെയ്തു.ഏറ്റവും വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കുന്ന രീതിയായ പരിഷ്‌ക്കരിച്ച ഡിഫറൻഷ്യൽ സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ വഴിയാണ് ബിവി2 സെല്ലുകളിൽ നിന്നുള്ള എക്സോസോമുകൾ വേർതിരിച്ചെടുത്തത്.RNA അല്ലെങ്കിൽ പ്രോട്ടീൻ വിശകലനത്തിനായി 300 µl PBS-ൽ എക്സോസോം പെല്ലറ്റ് വീണ്ടും സസ്പെൻഡ് ചെയ്യുക.ഒരു ബിസിഎ പ്രോട്ടീൻ അസ്സെ കിറ്റും (പിയേഴ്സ്, റോക്ക്ഫോർഡ്, ഐഎൽ, യുഎസ്എ) ഒരു നാനോഡ്രോപ്പ് 2000 സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്ററും ഉപയോഗിച്ചാണ് ഒറ്റപ്പെട്ട എക്സോസോമുകളുടെ സാന്ദ്രത നിർണ്ണയിക്കുന്നത്.
BV2 സെല്ലുകളിൽ നിന്നുള്ള അവശിഷ്ടങ്ങൾ അല്ലെങ്കിൽ BV2 ൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ എക്സോസോമുകൾ PRO-PREP™ പ്രോട്ടീൻ എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ സൊല്യൂഷനിൽ (iNtRon ബയോടെക്‌നോളജി, സിയോങ്‌നം, കൊറിയ) ലൈസ് ചെയ്യുകയും പ്രോട്ടീനുകൾ Coomassie ബ്രില്യന്റ് ബ്ലൂ സ്റ്റെയിൻഡ് 10% SDS പോളിഅക്രിലാമൈഡ് ജെല്ലുകളിലേക്ക് ലോഡ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു.കൂടാതെ, പ്രോട്ടീനുകൾ 2 മണിക്കൂർ പിവിഡിഎഫ് മെംബ്രണുകളിലേക്ക് മാറ്റി.വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടുകൾ ഒരു എക്സോസോമൽ മാർക്കറായി അലിക്സ് ആന്റിബോഡി (സെൽ സിഗ്നലിംഗ് ടെക്നോളജി, ബെവർലി, എംഎ, യുഎസ്എ) ഉപയോഗിച്ച് സാധൂകരിക്കപ്പെട്ടു.HRP-സംയോജിത ആട് ആന്റി മൗസ് IgG (H + L) (ബെഥിൽ ലബോറട്ടറീസ്, മോണ്ട്‌ഗോമറി, TX, USA), ഒരു LAS-1000 പ്ലസ് ലുമിനസെന്റ് ഇമേജ് അനലൈസർ (Fuji Photographic Film, Tokyo, Japan) എന്നിവ ഒരു ദ്വിതീയ ആന്റിബോഡിയായി ഉപയോഗിച്ചു..എക്സോസോമുകളുടെ വലിപ്പവും രൂപവും പഠിക്കാൻ ട്രാൻസ്മിഷൻ ഇലക്ട്രോൺ മൈക്രോസ്കോപ്പി നടത്തി.BV2 സെല്ലുകളിൽ നിന്ന് വേർതിരിച്ചെടുത്ത എക്സോസോമുകൾ (6.40 µg/µl) കാർബൺ പൂശിയ മെഷുകളിൽ തയ്യാറാക്കി, 1 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് 2% യുറേനൈൽ അസറ്റേറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് നെഗറ്റീവ് സ്റ്റെയിൻ ചെയ്തു.തയ്യാറാക്കിയ സാമ്പിളുകൾ ES1000W Erlangshen CCD ക്യാമറ (Gatan, Pleasanton, CA, USA) ഘടിപ്പിച്ച JEOL 1200-EX II (ടോക്കിയോ, ജപ്പാൻ) ഉപയോഗിച്ച് 80 kV ത്വരിതപ്പെടുത്തുന്ന വോൾട്ടേജിൽ നിരീക്ഷിച്ചു.
റൂം ടെമ്പറേച്ചറിൽ 15 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് PKH26 റെഡ് ഫ്ലൂറസെന്റ് ലിങ്കർ കിറ്റ് (സിഗ്മ-ആൽഡ്രിച്ച്, സെന്റ് ലൂയിസ്, MO, USA) ഉപയോഗിച്ച് BV2-ഉത്ഭവിച്ച എക്സോസോമുകൾ സ്റ്റെയിൻ ചെയ്തു.U87 സെല്ലുകൾ, 2×105, PKH26-ലേബൽ ചെയ്‌ത എക്‌സോസോമുകൾ (ചുവപ്പ്) അല്ലെങ്കിൽ എക്‌സോസോമുകൾ ഇല്ല, 5% CO2 ഇൻകുബേറ്ററിൽ 24 മണിക്കൂർ 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്‌തു.U87 സെൽ ന്യൂക്ലിയസുകൾ DAPI (നീല) ഉപയോഗിച്ച് സ്റ്റെയിൻ ചെയ്തു, U87 സെല്ലുകൾ 4% പാരാഫോർമാൽഡിഹൈഡിൽ 15 മിനിറ്റ് 4 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ഉറപ്പിക്കുകയും തുടർന്ന് Leica TCS SP8 STED CW കൺഫോക്കൽ മൈക്രോസ്കോപ്പ് സിസ്റ്റത്തിൽ വിശകലനം ചെയ്യുകയും ചെയ്തു (Leica Microsystems, Mannheim, Germany).നിരീക്ഷിക്കാവുന്നതാണ്.
Mir-X siRNA ഫസ്റ്റ് സ്ട്രാൻഡ് സിന്തസിസും SYBR qRT-PCR കിറ്റും (Takara Bio Inc., Shiga, Japan) ഉപയോഗിച്ച് siRNA യിൽ നിന്ന് cDNA സമന്വയിപ്പിച്ചു.SYBR Premix കലർന്ന പ്രൈമറുകളും ടെംപ്ലേറ്റുകളും ഉപയോഗിച്ച് iQ5 റിയൽ ടൈം PCR ഡിറ്റക്ഷൻ സിസ്റ്റം (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) ഉപയോഗിച്ചാണ് തത്സമയ ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് PCR നടത്തിയത്.ഡിഎൻഎ 40 സൈക്കിളുകൾക്കായി 95 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 15 സെക്കന്റിലും 60 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 60 സെക്കൻഡിലും ആംപ്ലിഫൈ ചെയ്തു.ഓരോ PCR പ്രതികരണത്തിൽ നിന്നുമുള്ള ഡാറ്റ iQ™5 ഒപ്റ്റിക്കൽ സിസ്റ്റം സോഫ്റ്റ്‌വെയറിന്റെ (Bio-Rad) ഡാറ്റാ അനാലിസിസ് മൊഡ്യൂൾ ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്തു.തിരഞ്ഞെടുത്ത ടാർഗെറ്റ് ജീനുകളും β-actin/siRNA (ഉം U6) തമ്മിലുള്ള ജീൻ എക്സ്പ്രഷനിലെ ആപേക്ഷിക മാറ്റങ്ങൾ സാധാരണ കർവ് രീതി ഉപയോഗിച്ച് കണക്കാക്കുന്നു.ഉപയോഗിച്ച പ്രൈമർ സീക്വൻസുകൾ പട്ടിക 1 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു.
3 x 104 U87 ഗ്ലിയോമ സെല്ലുകൾ 96-കിണർ പ്ലേറ്റുകളിൽ വിത്ത്, BV2 (50 μg/mL) ൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ ടോക്സോപ്ലാസ്മ ബാധിച്ച എക്സോസോമുകളോ അല്ലെങ്കിൽ BV2 (50 μg/mL) ൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ നോൺപൾസ് എക്സോസോമുകളോ ഉപയോഗിച്ച് 12, 18, 18 മണിക്കൂറിൽ നിയന്ത്രണങ്ങൾ ആയി കലർത്തി. .സെൽ കൗണ്ടിംഗ് കിറ്റ്-8 (ഡോജിൻഡോ, കുമാമോട്ടോ, ജപ്പാൻ) (സപ്ലിമെന്ററി കണക്കുകൾ S1-S3) 46 ഉപയോഗിച്ചാണ് സെൽ വ്യാപന നിരക്ക് നിർണ്ണയിച്ചത്.
5 ആഴ്ച പ്രായമുള്ള പെൺ BALB/c നഗ്ന എലികളെ ഓറിയന്റ് ബയോയിൽ നിന്ന് (സിയോങ്‌നം-സി, ദക്ഷിണ കൊറിയ) വാങ്ങുകയും മുറിയിലെ താപനിലയിലും (22± 2 ° C) ഈർപ്പത്തിലും (45± 15 ° C) അണുവിമുക്തമായ കൂടുകളിൽ വ്യക്തിഗതമായി സൂക്ഷിക്കുകയും ചെയ്തു.%) ഊഷ്മാവിൽ (22±2°C), ഈർപ്പം (45±15%).എസ്പിഎഫിന് (സിയോൾ നാഷണൽ യൂണിവേഴ്സിറ്റി സ്കൂൾ ഓഫ് മെഡിസിൻ ആനിമൽ സെന്റർ) കീഴിൽ 12 മണിക്കൂർ ലൈറ്റ് സൈക്കിളും 12 മണിക്കൂർ ഡാർക്ക് സൈക്കിളും നടത്തി.എലികളെ ക്രമരഹിതമായി 5 എലികൾ വീതമുള്ള മൂന്ന് ഗ്രൂപ്പുകളായി വിഭജിക്കുകയും എല്ലാ ഗ്രൂപ്പുകളും 400 മില്ലി പിബിഎസ് ഉപയോഗിച്ച് 1 x 107 U87 ഗ്ലിയോമ സെല്ലുകളും വളർച്ചാ ഘടകം കുറയ്ക്കുകയും ചെയ്ത BD Matrigel™ (BD സയൻസ്, മിയാമി, FL, USA) ഉപയോഗിച്ച് സബ്ക്യുട്ടേനിയസ് കുത്തിവയ്പ്പ് നടത്തി.ട്യൂമർ കുത്തിവയ്പ്പിന് ആറ് ദിവസത്തിന് ശേഷം, BV2 കോശങ്ങളിൽ നിന്ന് (ടോക്സോപ്ലാസ്മ അണുബാധയുള്ള/അല്ലാതെ) ഉരുത്തിരിഞ്ഞ 200 മില്ലിഗ്രാം എക്സോസോമുകൾ ട്യൂമർ സൈറ്റിലേക്ക് കുത്തിവയ്ക്കപ്പെട്ടു.ട്യൂമർ അണുബാധയ്ക്ക് ഇരുപത്തിരണ്ട് ദിവസങ്ങൾക്ക് ശേഷം, ഓരോ ഗ്രൂപ്പിലെയും എലികളുടെ ട്യൂമർ വലുപ്പം ആഴ്ചയിൽ മൂന്ന് തവണ ഒരു കാലിപ്പർ ഉപയോഗിച്ച് അളക്കുന്നു, ട്യൂമർ വോളിയം ഫോർമുല പ്രകാരം കണക്കാക്കുന്നു: 0.5×(വീതി)×2×ദൈർഘ്യം.
miRCURYTM LNA miRNA അറേ ഉപയോഗിച്ചുള്ള മൈക്രോആർഎൻഎ എക്സ്പ്രഷൻ വിശകലനം, 3100 മനുഷ്യൻ, എലി, എലി miRNA ക്യാപ്‌ചർ പ്രോബുകൾക്കിടയിൽ 1119 നല്ല സ്വഭാവമുള്ള എലികളെ ഉൾക്കൊള്ളുന്ന എംഎംയു, ആർനോ അറേകൾ (EXIQON, Vedbaek, Denmark) ഉണ്ട്.ഈ പ്രക്രിയയ്ക്കിടെ, കാളക്കുട്ടിയുടെ കുടലിലെ ആൽക്കലൈൻ ഫോസ്ഫേറ്റസ് ഉപയോഗിച്ചുള്ള ചികിത്സയിലൂടെ 5′-ഫോസ്ഫേറ്റിൽ നിന്ന് മൊത്തം ആർഎൻഎയുടെ 250 മുതൽ 1000 ng വരെ നീക്കം ചെയ്തു, തുടർന്ന് Hy3 ഗ്രീൻ ഫ്ലൂറസെന്റ് ഡൈ ഉപയോഗിച്ച് ലേബൽ ചെയ്തു.ഒരു ഹൈബ്രിഡൈസേഷൻ ചേംബർ കിറ്റും (എജിലന്റ് ടെക്നോളജീസ്, സാന്താ ക്ലാര, സിഎ, യുഎസ്എ) ഒരു ഹൈബ്രിഡൈസേഷൻ സ്ലൈഡ് കിറ്റും (എജിലന്റ് ടെക്നോളജീസ്) ഉപയോഗിച്ച് മൈക്രോഅറേ സ്ലൈഡുകൾ ലോഡ് ചെയ്തുകൊണ്ട് ലേബൽ ചെയ്ത സാമ്പിളുകൾ ഹൈബ്രിഡൈസ് ചെയ്തു.56 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 16 മണിക്കൂർ ഹൈബ്രിഡൈസേഷൻ നടത്തി, തുടർന്ന് നിർമ്മാതാവിന്റെ ശുപാർശകൾക്ക് അനുസൃതമായി മൈക്രോഅറേകൾ കഴുകി.പ്രോസസ്സ് ചെയ്ത മൈക്രോഅറേ സ്ലൈഡുകൾ പിന്നീട് എജിലന്റ് G2565CA മൈക്രോഅറേ സ്കാനർ സിസ്റ്റം (എജിലന്റ് ടെക്നോളജീസ്) ഉപയോഗിച്ച് സ്കാൻ ചെയ്തു.എജിലന്റ് ഫീച്ചർ എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ സോഫ്‌റ്റ്‌വെയർ പതിപ്പ് 10.7.3.1 (എജിലന്റ് ടെക്‌നോളജീസ്) ഉപയോഗിച്ച് സ്‌കാൻ ചെയ്‌ത ചിത്രങ്ങൾ ഇറക്കുമതി ചെയ്‌തു, പരിഷ്‌ക്കരിച്ച എക്‌സിക്കോൺ പ്രോട്ടോക്കോളിന്റെ അനുബന്ധ GAL ഫയൽ ഉപയോഗിച്ച് ഓരോ ചിത്രത്തിന്റെയും ഫ്ലൂറസെൻസ് തീവ്രത കണക്കാക്കി.നിലവിലെ പഠനത്തിനായുള്ള മൈക്രോഅറേ ഡാറ്റ GPL32397 എന്ന ആക്‌സസ് നമ്പറിന് കീഴിൽ GEO ഡാറ്റാബേസിൽ നിക്ഷേപിച്ചിരിക്കുന്നു.
ടോക്സോപ്ലാസ്മ ബാധിച്ച RH അല്ലെങ്കിൽ ME49 സ്ട്രെയിനുകളുടെ മൈക്രോഗ്ലിയയിലെ മുതിർന്ന എക്സോസോമൽ മൈആർഎൻഎകളുടെ എക്സ്പ്രഷൻ പ്രൊഫൈലുകൾ വിവിധ നെറ്റ്‌വർക്ക് ടൂളുകൾ ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്തു.ട്യൂമർ വികസനവുമായി ബന്ധപ്പെട്ട miRNA-കൾ miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) ഉപയോഗിച്ച് തിരിച്ചറിയുകയും 8.0-നേക്കാൾ കൂടുതലുള്ള നോർമലൈസ്ഡ് സിഗ്നൽ തീവ്രത (log2) ഉപയോഗിച്ച് ഫിൽട്ടർ ചെയ്യുകയും ചെയ്തു.miRNA-കൾക്കിടയിൽ, T. gondii ബാധിച്ച RH അല്ലെങ്കിൽ ME49 സ്‌ട്രെയിനുകളാൽ മാറ്റം വരുത്തിയ miRNA-കളുടെ ഫിൽട്ടർ വിശകലനം വഴി വ്യത്യസ്‌തമായി പ്രകടിപ്പിക്കുന്ന miRNA-കൾ 1.5-ൽ അധികം മടങ്ങ് മാറ്റം വരുത്തിയതായി കണ്ടെത്തി.
Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ഉപയോഗിച്ച് opti-MEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA) ൽ ആറ്-കിണർ പ്ലേറ്റുകളിൽ (3 x 105 സെല്ലുകൾ/കിണർ) സെല്ലുകൾ വിത്ത് പാകി.കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെട്ട കോശങ്ങൾ 6 മണിക്കൂർ സംസ്ക്കരിച്ച ശേഷം മീഡിയം പുതിയ സമ്പൂർണ്ണ മാധ്യമത്തിലേക്ക് മാറ്റി.കോശങ്ങൾ മാറ്റി 24 മണിക്കൂർ കഴിഞ്ഞ് വിളവെടുത്തു.
Excel സോഫ്‌റ്റ്‌വെയർ (Microsoft, Washington, DC, USA) ഉപയോഗിച്ചുള്ള വിദ്യാർത്ഥികളുടെ ടി-ടെസ്റ്റ് ഉപയോഗിച്ചാണ് സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ വിശകലനം പ്രധാനമായും നടത്തിയത്.പരീക്ഷണാത്മക മൃഗ വിശകലനത്തിനായി, പ്രിസം 3.0 സോഫ്‌റ്റ്‌വെയർ (ഗ്രാഫ്‌പാഡ് സോഫ്റ്റ്‌വെയർ, ലാ ജൊല്ല, സിഎ, യുഎസ്എ) ഉപയോഗിച്ച് ഒരു ടു-വേ ANOVA നടത്തി. P- മൂല്യങ്ങൾ <0.05 സ്ഥിതിവിവരക്കണക്ക് പ്രാധാന്യമുള്ളതായി കണക്കാക്കുന്നു. P- മൂല്യങ്ങൾ <0.05 സ്ഥിതിവിവരക്കണക്ക് പ്രാധാന്യമുള്ളതായി കണക്കാക്കുന്നു. Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P മൂല്യങ്ങൾ <0.05 സ്ഥിതിവിവരക്കണക്ക് പ്രാധാന്യമുള്ളതായി കണക്കാക്കുന്നു. പി 值< 0.05 被认为具有统计学意义。 പി 值< 0.05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P മൂല്യങ്ങൾ <0.05 സ്ഥിതിവിവരക്കണക്ക് പ്രാധാന്യമുള്ളതായി കണക്കാക്കുന്നു.
ഈ പഠനത്തിൽ ഉപയോഗിച്ച എല്ലാ പരീക്ഷണാത്മക പ്രോട്ടോക്കോളുകളും സിയോൾ നാഷണൽ യൂണിവേഴ്സിറ്റി സ്കൂൾ ഓഫ് മെഡിസിൻ (IRB നമ്പർ SNU-150715-2) ഇൻസ്റ്റിറ്റ്യൂഷണൽ റിവ്യൂ ബോർഡ് അംഗീകരിച്ചു.
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
ഫർലി, ജെ. തുടങ്ങിയവർ.2018-ൽ കണക്കാക്കിയ ആഗോള കാൻസർ സംഭവങ്ങളും മരണനിരക്കും: GLOBOCAN ഉറവിടങ്ങളും രീതികളും.വ്യാഖ്യാനം.ജെ. റക്ക് 144, 1941–1953 (2019).
റഷീദ്, എസ്, റഹ്മാൻ, കെ റഷീദ്, എസ്, റഹ്മാൻ, കെറാഷിദ്, എസ്., റഹ്മാൻ, കെ., ആകാശ്, MS A റിസ്ക് ഫാക്‌ടറുകളുടെ ബ്രെയിൻ ട്യൂമറുകളുടെയും പ്രധാന ചികിത്സാ ഇടപെടലുകളുടെയും അവലോകനം. റഷീദ്, എസ്., റഹ്മാൻ, കെ. & ആകാശ്, MS 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施。 റഷീദ്, എസ്., റഹ്മാൻ, കെ. & ആകാശ്, MS ബ്രെയിൻ ട്യൂമർ അപകട ഘടകങ്ങളെക്കുറിച്ചും ചികിത്സാ ഇടപെടലുകളെക്കുറിച്ചും ആഴത്തിലുള്ള ധാരണ.റാഷിദ്, എസ്., റഹ്മാൻ, കെ., ആകാശ്, MS A റിസ്ക് ഫാക്‌ടറുകളുടെ ബ്രെയിൻ ട്യൂമറുകളുടെയും പ്രധാന ചികിത്സാ ഇടപെടലുകളുടെയും അവലോകനം.ബയോമെഡിക്കൽ സയൻസ്.ഫാർമസിസ്റ്റ്.143, 112119 (2021).
Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. മനുഷ്യ ഓറോഡിജസ്റ്റീവ്, സ്ത്രീ ജനനേന്ദ്രിയ ലഘുലേഖ കാൻസറുകളിലെ ബാക്ടീരിയ-വൈറൽ ഇടപെടലുകൾ: എപ്പിഡെമിയോളജിക്കൽ, ലബോറട്ടറി തെളിവുകളുടെ ഒരു സംഗ്രഹം. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. മനുഷ്യ ഓറോഡിജസ്റ്റീവ്, സ്ത്രീ ജനനേന്ദ്രിയ ലഘുലേഖ കാൻസറുകളിലെ ബാക്ടീരിയ-വൈറൽ ഇടപെടലുകൾ: എപ്പിഡെമിയോളജിക്കൽ, ലബോറട്ടറി തെളിവുകളുടെ ഒരു സംഗ്രഹം.കാറ്റോ ഐ., ഷാങ് ജെ., സൺ ജെ. മനുഷ്യ ദഹനനാളത്തിലെയും സ്ത്രീ ജനനേന്ദ്രിയത്തിലെയും കാൻസറിലെ ബാക്ടീരിയ-വൈറൽ ഇടപെടലുകൾ: എപ്പിഡെമിയോളജിക്കൽ, ലബോറട്ടറി ഡാറ്റയുടെ സംഗ്രഹം. കാറ്റോ, ഐ., ഷാങ്, ജെ. & സൺ, ജെ. 人类口腔消化道癌和女性生殖道癌中的细菌-病毒相互作用 Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. മനുഷ്യ ഓറൽ അറയിലെ ദഹനത്തിലും സ്ത്രീകളുടെ പ്രത്യുത്പാദന ലഘുലേഖയിലും ബാക്ടീരിയ-വൈറൽ ഇടപെടൽ: ജനപ്രിയ രോഗ ശാസ്ത്രത്തിന്റെയും ലബോറട്ടറി തെളിവുകളുടെയും സംഗ്രഹം.കാറ്റോ ഐ., ഴാങ് ജെ., സൺ ജെ. ഹ്യൂമൻ ഗ്യാസ്ട്രോഇന്റസ്റ്റൈനൽ ക്യാൻസറിലും സ്ത്രീ ജനനേന്ദ്രിയ അർബുദത്തിലും ബാക്ടീരിയ-വൈറൽ ഇടപെടലുകൾ: എപ്പിഡെമിയോളജിക്കൽ, ലബോറട്ടറി ഡാറ്റയുടെ ഒരു സംഗ്രഹം.കാൻസർ 14, 425 (2022).
മഗോൺ, കെഎൽ & പാരിഷ്, ജെഎൽ അണുബാധ മുതൽ കാൻസർ വരെ: ഡിഎൻഎ ട്യൂമർ വൈറസുകൾ ഹോസ്റ്റ് സെൽ സെൻട്രൽ കാർബണിനെയും ലിപിഡ് മെറ്റബോളിസത്തെയും എങ്ങനെ മാറ്റുന്നു. മഗോൺ, കെഎൽ & പാരിഷ്, ജെഎൽ അണുബാധ മുതൽ കാൻസർ വരെ: ഡിഎൻഎ ട്യൂമർ വൈറസുകൾ ഹോസ്റ്റ് സെൽ സെൻട്രൽ കാർബണിനെയും ലിപിഡ് മെറ്റബോളിസത്തെയും എങ്ങനെ മാറ്റുന്നു.മഹോൻ, കെഎൽ, പാരിഷ്, ജെഎൽ ഫയർ ഇൻഫെക്ഷൻ മുതൽ ക്യാൻസർ വരെ: ഡിഎൻഎ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള ട്യൂമർ വൈറസുകൾ ആതിഥേയ സെൽ സെൻട്രൽ കാർബണിനെയും ലിപിഡ് മെറ്റബോളിസത്തെയും എങ്ങനെ മാറ്റുന്നു. മഗോൺ, KL & പാരിഷ്, JL മഗോൺ, കെഎൽ & പാരിഷ്, ജെഎൽ അണുബാധ മുതൽ കാൻസർ വരെ: ഡിഎൻഎ ട്യൂമർ വൈറസുകൾ ഹോസ്റ്റ് സെൽ സെൻട്രൽ കാർബണിനെയും ലിപിഡ് മെറ്റബോളിസത്തെയും എങ്ങനെ മാറ്റുന്നു.മഹോൺ, കെ‌എൽ, പാരിഷ്, ജെ‌എൽ ക്യാൻസറിലേക്കുള്ള അണുബാധ: ഡിഎൻഎ ട്യൂമർ വൈറസുകൾ ആതിഥേയ കോശങ്ങളിലെ സെൻട്രൽ കാർബണും ലിപിഡ് മെറ്റബോളിസവും എങ്ങനെ മാറ്റുന്നു.ഓപ്പൺ ബയോളജി.11, 210004 (2021).
കോറിയ ഡ കോസ്റ്റ, ജെഎം തുടങ്ങിയവർ.സ്കിസ്റ്റോസോമുകളുടെയും ലിവർ ഫ്ളൂക്കുകളുടെയും കാറ്റെകോൾ ഈസ്ട്രജൻ, ഹെൽമിൻത്ത്-അസോസിയേറ്റഡ് ക്യാൻസർ.മുന്നിൽ.ഉള്ളിൽ ചൂട്.5, 444 (2014).