ജിയാർഡിയ ഡുവോഡിനം ഒരു പരാന്നഭോജിയാണ്, ഇത് ജിയാർഡിയാസിസിന് കാരണമാകുന്നു, ഇത് വയറിളക്കത്തിൻ്റെ ക്ലിനിക്കൽ ലക്ഷണങ്ങളുള്ള ചെറിയ കുട്ടികളിൽ പ്രത്യേകിച്ച് സാധാരണമാണ്.എക്‌സ്‌ട്രാ സെല്ലുലാർ ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് ഇൻട്രാ സെല്ലുലാർ ഒലിഗോമറൈസേഷൻ പോലുള്ള റിസപ്റ്റർ 3 (NLRP3) ബൈൻഡിംഗ് ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകളെ സജീവമാക്കുകയും എക്‌സ്‌ട്രാ സെല്ലുലാർ വെസിക്കിൾ (EV) സ്രവത്തിലൂടെ ഹോസ്റ്റ് കോശജ്വലന പ്രതികരണങ്ങളെ നിയന്ത്രിക്കുകയും ചെയ്യുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങൾ മുമ്പ് റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തിട്ടുണ്ട്.എന്നിരുന്നാലും, ഈ പ്രക്രിയയിൽ ഉൾപ്പെട്ടിരിക്കുന്ന രോഗകാരിയുമായി ബന്ധപ്പെട്ട ഡുവോഡിനോകോക്കൽ EV (GEV) യുടെ കൃത്യമായ തന്മാത്രാ പാറ്റേണുകളും ജിയാർഡിയാസിസിൽ NLRP3 കോശജ്വലനത്തിൻ്റെ പങ്കും വ്യക്തമാക്കപ്പെടേണ്ടതുണ്ട്.
പുനഃസംയോജിത യൂക്കറിയോട്ടിക് എക്സ്പ്രഷൻ പ്ലാസ്മിഡുകൾ pcDNA3.1(+)-ആൽഫ-2, GEV-യിലെ ആൽഫ-7.3 ഗിയാർഡിനുകൾ എന്നിവ നിർമ്മിച്ച്, മൗസ് പ്രൈമറി പെരിറ്റോണിയൽ മാക്രോഫേജുകളിലേക്ക് മാറ്റുകയും, വീക്കം ടാർഗെറ്റ് തന്മാത്ര കാസ്‌പേസ്-1 അളക്കുന്നതിലൂടെ കണ്ടെത്തുകയും ചെയ്തു.p20 എക്‌സ്‌പ്രഷൻ ലെവൽ സ്‌ക്രീൻ ചെയ്തു..ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് ആൽഫ-2, ആൽഫ-7.3 ജിയാർഡിനുകൾ എന്നിവ ആദ്യം തിരിച്ചറിഞ്ഞത് എൻഎൽആർപി3 ഇൻഫ്‌ളേമസോം (NLRP3, പ്രോ-ഇൻ്റർലൂക്കിൻ-1 ബീറ്റ [IL-1β], പ്രോ-കാസ്‌പേസ്-1, കാസ്‌പേസ്-1 p20), ഐഎൽ സ്രവണം അളക്കുന്നതിലൂടെയാണ്.1β ലെവലുകൾ, അപ്പോപ്റ്റോട്ടിക് സ്പോട്ടഡ് പ്രോട്ടീൻ (ASC) ഒളിഗോമറൈസേഷൻ ലെവലുകൾ, NLRP3, ASC എന്നിവയുടെ ഇമ്മ്യൂണോഫ്ലൂറസൻ്റ് ലോക്കലൈസേഷൻ.ജി. ഡുവോഡിനാലിസിൻ്റെ രോഗകാരികളിൽ NLRP3 കോശജ്വലനത്തിൻ്റെ പങ്ക് പിന്നീട് എലികളെ ഉപയോഗിച്ച് വിലയിരുത്തി, അതിൽ NLRP3 ആക്ടിവേഷൻ തടഞ്ഞു (NLRP3 തടയപ്പെട്ട എലികൾ) ശരീരഭാരത്തിലെ പാത്തോളജിക്കൽ മാറ്റങ്ങൾ, ഡുവോഡിനൽ പാരാസൈറ്റിക് ലോഡ്, ഡുവോഡിനൽ ടിഷ്യു എന്നിവ നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടു.കൂടാതെ, ഹിയാർഡിനുകൾ ആൽഫ-2, ആൽഫ-7.3 എന്നിവ എൻഎൽആർപി3 ഇൻഫ്‌ളേമസോം വഴി വിവോയിൽ IL-1β സ്രവത്തെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നുണ്ടോ എന്ന് ഞങ്ങൾ അന്വേഷിക്കുകയും എലികളിലെ ജി. ഡുവോഡിനാലിസിൻ്റെ രോഗകാരികളിൽ ഈ തന്മാത്രകളുടെ പങ്ക് നിർണ്ണയിക്കുകയും ചെയ്തു.
ആൽഫ-2, ആൽഫ-7.3 ജിയാർഡിനുകൾ എൻഎൽആർപി3 ഇൻഫ്‌ളേമസോം ഇൻ വിട്രോയുടെ പ്രവർത്തനത്തെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നു.ഇത് p20 കാസ്‌പേസ്-1 സജീവമാക്കുന്നതിനും NLRP3, പ്രോ-IL-1β, പ്രോ-കാസ്‌പേസ്-1 പ്രോട്ടീനുകളുടെ എക്‌സ്‌പ്രഷൻ ലെവലിൽ വർദ്ധനവ്, IL-1β സ്രവത്തിൽ ഗണ്യമായ വർദ്ധനവ്, ASA പാടുകൾ രൂപപ്പെടുന്നതിനും കാരണമായി. സൈറ്റോപ്ലാസം, എഎസ്എ ഒലിഗോമറൈസേഷൻ്റെ ഇൻഡക്ഷൻ.NLRP3 വീക്കം പെനൈൽ നഷ്ടം എലികളിലെ G. ഡുവോഡിനാലിസിൻ്റെ രോഗകാരിയെ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു.എൻഎൽആർപി 3-തടഞ്ഞ എലികളിൽ നിന്ന് ഗേവേജ് ഉപയോഗിച്ച് സിസ്റ്റുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിക്കുന്ന എലികളിൽ ട്രോഫോസോയ്‌റ്റുകളുടെ എണ്ണം വർദ്ധിക്കുകയും ഡുവോഡിനൽ വില്ലിക്ക് ഗുരുതരമായ കേടുപാടുകൾ സംഭവിക്കുകയും ചെയ്‌തു.ജിയാർഡിൻസ് ആൽഫ-2, ആൽഫ-7.3 എന്നിവയ്ക്ക് എൻഎൽആർപി3 ഇൻഫ്‌ളേമസോം വഴി ഐഎൽ-1β സ്രവിക്കാൻ കഴിയുമെന്നും ജിയാർഡിൻസ് ആൽഫ-2, ആൽഫ-7.3 എന്നിവ ഉപയോഗിച്ചുള്ള പ്രതിരോധ കുത്തിവയ്പ്പ് എലികളിലെ ജി.
ഒരുമിച്ച് നോക്കിയാൽ, ജിയാർഡിയ ആൽഫ-2, ആൽഫ-7.3 എന്നിവ ആതിഥേയ NLRP3 വീക്കം നിയന്ത്രിക്കുകയും എലികളിലെ G. ഡുവോഡിനാലിസിൻ്റെ അണുബാധ കുറയ്ക്കുകയും ചെയ്യുന്നുവെന്ന് ഈ പഠനത്തിൻ്റെ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു, ഇത് ജിയാർഡിയാസിസ് തടയുന്നതിനുള്ള ലക്ഷ്യങ്ങളാണ്.
ജിയാർഡിയ ഡുവോഡിനം ഒരു എക്സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ പ്രോട്ടോസോവൻ പരാന്നഭോജിയാണ്, ഇത് ചെറുകുടലിൽ വസിക്കുകയും പ്രതിവർഷം 280 ദശലക്ഷം ഗിയാർഡിയാസിസ് കേസുകൾക്ക് വയറിളക്കം ഉണ്ടാക്കുകയും ചെയ്യുന്നു, പ്രത്യേകിച്ച് വികസ്വര രാജ്യങ്ങളിലെ കൊച്ചുകുട്ടികൾക്കിടയിൽ [1].എം. ഡുവോഡിനം സിസ്റ്റുകളാൽ മലിനമായ കുടിവെള്ളമോ ഭക്ഷണമോ ആളുകൾക്ക് അണുബാധയുണ്ടാക്കുന്നു, അത് ആമാശയത്തിലേക്ക് പ്രവേശിക്കുകയും ഗ്യാസ്ട്രിക് ജ്യൂസുകളിൽ നിന്ന് പുറന്തള്ളപ്പെടുകയും ചെയ്യുന്നു.ജിയാർഡിയ ഡുവോഡിനം ട്രോഫോസോയിറ്റുകൾ ഡുവോഡിനൽ എപിത്തീലിയത്തിൽ ഘടിപ്പിച്ച് ഓക്കാനം, ഛർദ്ദി, വയറിളക്കം, വയറുവേദന, ശരീരഭാരം കുറയ്ക്കൽ എന്നിവയ്ക്ക് കാരണമാകുന്നു.ഇമ്മ്യൂണോ ഡിഫിഷ്യൻസിയും സിസ്റ്റിക് ഫൈബ്രോസിസും ഉള്ള വ്യക്തികൾ അണുബാധയ്ക്ക് ഇരയാകുന്നു.ഓറൽ, ഗുദ ലൈംഗികതയിലൂടെയും അണുബാധ ഉണ്ടാകാം [2].മെട്രോണിഡാസോൾ, ടിനിഡാസോൾ, നിറ്റാസോക്‌സാനൈഡ് തുടങ്ങിയ മരുന്നുകളാണ് ഡുവോഡിനൽ അണുബാധകൾക്കുള്ള അഭികാമ്യമായ ചികിത്സാ ഉപാധികൾ [3].എന്നിരുന്നാലും, ഈ കീമോതെറാപ്പി മരുന്നുകൾ ഓക്കാനം, കാർസിനോജെനിസിസ്, ജെനോടോക്സിസിറ്റി [4] തുടങ്ങിയ പ്രതികൂല പാർശ്വഫലങ്ങൾ ഉണ്ടാക്കുന്നു.അതിനാൽ, ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് അണുബാധ തടയുന്നതിന് കൂടുതൽ ഫലപ്രദമായ തന്ത്രങ്ങൾ വികസിപ്പിക്കേണ്ടതുണ്ട്.
സഹജമായ രോഗപ്രതിരോധ പ്രതികരണത്തിൻ്റെ ഭാഗമായ സൈറ്റോസോളിക് പ്രോട്ടീൻ കോംപ്ലക്സുകളുടെ ഒരു വിഭാഗമാണ് ഇൻഫ്‌ളമസോമുകൾ, ഇത് രോഗാണുക്കളുടെ ആക്രമണത്തിനെതിരെ പ്രതിരോധിക്കാനും കോശജ്വലന പ്രതികരണങ്ങളിൽ മധ്യസ്ഥത വഹിക്കാനും സഹായിക്കുന്നു [5].ഈ ഇൻഫ്ലമസോമുകളിൽ, ന്യൂക്ലിയോടൈഡ്-ബൈൻഡിംഗ് ഒലിഗോമറൈസേഷൻ (എൻഒഡി) റിസപ്റ്റർ 3 (എൻഎൽആർപി3) ന്യൂക്ലിയോടൈഡ്-ബൈൻഡിംഗ് ഒലിഗോമറൈസേഷൻ (എൻഎൽആർപി3) ന്യൂക്ലിയോടൈഡ്-ബൈൻഡിംഗ് പോലെയുള്ള ഇൻഫ്‌ളേമാസോം വിപുലമായി പഠിച്ചിട്ടുണ്ട്, കാരണം ഇത് വിവിധ രോഗകാരികൾ/കേടുപാടുകൾ/പാറ്റേണുകൾ എന്നിവയാൽ കണ്ടെത്താനാകും. DAMP), സഹജമായ രോഗപ്രതിരോധ സംവിധാനത്തെ തിരിച്ചറിയുകയും സജീവമാക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.കൂടാതെ പല കോശജ്വലന രോഗങ്ങളിലും കുടൽ ഹോമിയോസ്റ്റാസിസ് നിയന്ത്രിക്കുന്നു [6,7,8].ഇതിൽ പാറ്റേൺ റെക്കഗ്നിഷൻ റിസപ്റ്റർ (PRR) NLRP3, ഒരു അഡാപ്റ്റർ അപ്പോപ്റ്റോട്ടിക് സ്പോട്ടഡ് പ്രോട്ടീൻ (ASC), ഒരു എഫക്റ്റർ പ്രോകാസ്‌പേസ്-1 അല്ലെങ്കിൽ പ്രോകാസ്‌പേസ്-11 എന്നിവ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.നിയോസ്‌പോറ കാനിനം [9], പാരാകോക്സിഡോയിഡ്‌സ് ബ്രാസിലിയൻസിസ് [10], ലീഷ്മാനിയ പഠനങ്ങൾ എന്നിവയിൽ നിരീക്ഷിച്ചതുപോലെ, രോഗാണുക്കളുടെ അധിനിവേശത്തിനെതിരായ ഒരു ആതിഥേയനായി NLRP3 ഇൻഫ്‌ളേമസോം പ്രവർത്തിക്കുന്നു.[11], എന്നാൽ NLRP3 കോശജ്വലനം സജീവമാക്കുന്നത് പ്രതിരോധ പ്രതിരോധ പ്രതികരണങ്ങളെ പരിമിതപ്പെടുത്തുകയും രോഗത്തിൻ്റെ പുരോഗതി വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു, ഉദാഹരണത്തിന്, വിരകളിൽ [12].ഞങ്ങളുടെ മുൻ കണ്ടെത്തലുകളെ അടിസ്ഥാനമാക്കി, എക്‌സ്‌ട്രാ സെല്ലുലാർ ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് എൻഎൽആർപി 3 വീക്കം ഇൻട്രാ സെല്ലുലാർ ആക്റ്റിവേഷൻ ട്രിഗർ ചെയ്യുകയും എക്‌സ്‌ട്രാ സെല്ലുലാർ വെസിക്കിളുകൾ (ഇവികൾ) സ്രവിച്ച് ഹോസ്റ്റ് കോശജ്വലന പ്രതികരണങ്ങൾ മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യുകയും ചെയ്യുന്നു [13].എന്നിരുന്നാലും, വിവോയിലെ ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് അണുബാധയിൽ NLRP3 ഇൻഫ്‌ളേമസമിൻ്റെ പങ്ക് നിർണ്ണയിക്കപ്പെടേണ്ടതുണ്ട്.
ജിയാർഡിനുകളെ യഥാർത്ഥത്തിൽ ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് സൈറ്റോസ്‌ലെറ്റണിൻ്റെ ഘടനാപരമായ ഘടകങ്ങളായാണ് വിവരിച്ചത്, ചെറുകുടലിൽ ട്രോഫോസോയിറ്റ് ചലനത്തിലും എപ്പിത്തീലിയൽ സെൽ അറ്റാച്ച്‌മെൻ്റിലും ഒരു പ്രധാന പങ്ക് വഹിക്കുന്നു.പരിസ്ഥിതിയുമായി നന്നായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നതിനും അവയുടെ രോഗകാരികൾ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിനും, ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് ട്രോഫോസോയിറ്റുകൾ 8 ഫ്ലാഗെല്ല, 1 മിഡിൽ ബോഡി, 1 വെൻട്രൽ ഡിസ്ക് എന്നിവ അടങ്ങുന്ന ഒരു സവിശേഷമായ സൈറ്റോസ്‌കെലെറ്റൽ ഘടന വികസിപ്പിച്ചെടുത്തു [14].ജിയാർഡിയ ഡുവോഡിനത്തിൻ്റെ ട്രോഫോസോയിറ്റുകൾ അവയുടെ സൈറ്റോസ്‌കെലിറ്റൺ ഉപയോഗിച്ച് മുകളിലെ ചെറുകുടലിലേക്ക്, പ്രത്യേകിച്ച് ഡുവോഡിനത്തിലേക്ക് തുളച്ചുകയറുകയും എൻ്ററോസൈറ്റുകളുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.സെൽ മെറ്റബോളിസം ഉപയോഗിച്ച് അവ നിരന്തരം മൈഗ്രേറ്റ് ചെയ്യുകയും എപ്പിത്തീലിയൽ കോശങ്ങളുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.അതിനാൽ, അവയുടെ സൈറ്റോസ്‌കെലിറ്റണും വൈറലൻസും തമ്മിൽ അടുത്ത ബന്ധമുണ്ട്.ജിയാർഡിയ ഡുവോഡിനത്തിന് പ്രത്യേകമായുള്ള ജിയാർഡിനുകൾ സൈറ്റോസ്‌കെലിറ്റൺ ഘടനയുടെ ഘടകങ്ങളാണ് [15] അവയെ നാല് ക്ലാസുകളായി തിരിച്ചിരിക്കുന്നു: α-, β-, γ-, δ-giardines.α-ജിയാർഡിൻ കുടുംബത്തിൽ 21 അംഗങ്ങളുണ്ട്, ഇവരെല്ലാം ഫോസ്ഫോളിപിഡുകളെ ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതിനുള്ള കാൽസ്യത്തെ ആശ്രയിക്കുന്ന കഴിവുണ്ട് [16].അവർ സൈറ്റോസ്‌കെലിറ്റണിനെ സെൽ മെംബ്രണുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് മൂലമുണ്ടാകുന്ന വയറിളക്കം ഉള്ളവരിൽ, α-ഗിയാർഡിനുകൾ വളരെ പ്രകടമാവുകയും അണുബാധയുടെ സമയത്ത് രോഗപ്രതിരോധ ശേഷിയുള്ളവയുമാണ് [17].ജിയാർഡിയ ആൽഫ-1 അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള ഹെറ്ററോളജിക്കൽ വാക്‌സിനുകൾ എലികളിലെ ജിയാർഡിയാസിസിൽ നിന്ന് സംരക്ഷിക്കപ്പെടുകയും വാക്‌സിൻ വികസിപ്പിക്കുന്നതിനുള്ള സാധ്യതയുള്ള കാൻഡിഡേറ്റ് ആൻ്റിജനുകളാണ് [18].ആൽഫ-8 ജിയാർഡിൻ, പ്ലാസ്മ മെംബ്രണിലും ഫ്ലാഗെല്ലയിലും പ്രാദേശികവൽക്കരിച്ചിരിക്കുന്നു, പക്ഷേ വെൻട്രൽ ഡിസ്കിലല്ല, ജി. ഡുവോഡിനാലിസിലെ ട്രോഫോസോയിറ്റുകളുടെ ചലനാത്മകതയും വളർച്ചാ നിരക്കും വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു [19].ആൽഫ-14 ഗിയാർഡിൻ ഫ്ലാഗെല്ലയിലെ മൈക്രോട്യൂബ്യൂൾ ഘടനകളിൽ ഘടിപ്പിക്കുകയും ജി. ഡുവോഡിനാലിസിൻ്റെ പ്രവർത്തനക്ഷമതയെ ബാധിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു [20].ആൽഫ-11 ജിയാർഡിൻ ജീവിതചക്രത്തിലുടനീളം ധാരാളമായി കാണപ്പെടുന്നു, ആൽഫ-11 ഗിയാർഡിൻ അമിതമായി പ്രകടമാകുന്നത് ജി. ഡുവോഡിനാലിസിനെത്തന്നെ നശിപ്പിക്കുന്നു [21].എന്നിരുന്നാലും, ആൽഫ-2 ജിയാർഡിൻ, ആൽഫ-7.3 ജിയാർഡിൻ എന്നിവ ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് അണുബാധയ്‌ക്കെതിരെയും അവയുടെ അടിസ്ഥാന സംവിധാനങ്ങൾക്കെതിരെയും സംരക്ഷണം നൽകുന്നതാണോ എന്ന് വ്യക്തമല്ല.
ഈ പഠനത്തിൽ, റീകോമ്പിനൻ്റ് യൂക്കറിയോട്ടിക് എക്സ്പ്രഷൻ പ്ലാസ്മിഡുകൾ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine, pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine എന്നിവ ഹോസ്‌റ്റ് NLRP3 സജീവമാക്കുന്നതിന് മൗസ് പ്രൈമറി പെരിറ്റോണിയൽ മാക്രോഫേജുകളിലേക്ക് മാറ്റപ്പെട്ടു.തുടർന്ന് കോശജ്വലന ലക്ഷ്യങ്ങൾ പരിശോധിച്ചു.ജി. ഡുവോഡിനാലിസിൻ്റെ രോഗകാരികളിൽ NLRP3 കോശജ്വലനത്തിൻ്റെ പങ്ക് ഞങ്ങൾ വിലയിരുത്തി, ആൽഫ-2, ആൽഫ-7,3 ഗിയാർഡിനുകൾ വിവോയിലെ NLRP3 ഇൻഫ്‌ളേമസമിനെ സജീവമാക്കാൻ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നുണ്ടോ എന്ന് അന്വേഷിച്ചു. ജി. ഡുവോഡിനാലിസ്.ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് അണുബാധ തടയുന്നതിനുള്ള വാഗ്ദാനമായ ലക്ഷ്യങ്ങൾ വികസിപ്പിക്കുക എന്നതായിരുന്നു ഞങ്ങളുടെ പൊതുവായ ലക്ഷ്യം.
വൈൽഡ് ടൈപ്പ് (WT) C57BL/5-8 ആഴ്ച പ്രായമുള്ള 6 പെൺ എലികളെ ലിയോണിംഗ് ചാങ്‌ഷെംഗ് പരീക്ഷണാത്മക മൃഗ കേന്ദ്രത്തിൽ നിന്ന് (ലിയോണിംഗ്, ചൈന) വാങ്ങി.എലികൾക്ക് വെള്ളം സൗജന്യമായി ലഭിക്കുകയും അണുവിമുക്തമാക്കിയ ഭക്ഷണം ലഭിക്കുകയും 12/12 മണിക്കൂർ വെളിച്ചം/ഇരുണ്ട സൈക്കിളിൽ സൂക്ഷിക്കുകയും ചെയ്തു.അണുബാധയ്ക്ക് മുമ്പ്, ആംപിസിലിൻ (1 mg/mL), വാൻകോമൈസിൻ (1 mg/mL), നിയോമൈസിൻ (1.4 mg/mL) (എല്ലാം ചൈനയിലെ ഷാങ്ഹായ്, കൃത്രിമ ജീവികളിൽ നിന്ന് വാങ്ങിയത്) എന്നിവ അടങ്ങിയ കുടിവെള്ളത്തിൽ എലികൾക്ക് ആൻറിബയോട്ടിക്കുകൾ സ്വാഭാവികമായും ലഭിച്ചു. ].].24 മണിക്കൂറും കഴിക്കാനും കുടിക്കാനുമുള്ള കഴിവ് നഷ്ടപ്പെട്ട എലികൾ, ≥ 20% ശരീരഭാരം കുറയുന്നത് സെർവിക്കൽ ഡിസ്ലോക്കേഷൻ വഴി മനുഷ്യത്വപരമായി ദയാവധം ചെയ്തു.
ഡബ്ല്യുബി ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് ട്രോഫോസോയിറ്റുകൾ (അമേരിക്കൻ ടൈപ്പ് കൾച്ചർ കളക്ഷൻ, മനസാസ്, യുഎസ്എ) 12.5% ​​ഗര്ഭപിണ്ഡത്തിൻ്റെ ബോവിന് സെറം (എഫ്ബിഎസ്; എവരി ഗ്രീൻ, സെജിയാങ്, ചൈന), 0.1% ബോവിൻ പിത്തരസം (സിഗ്മ-ആൽഡ്രിച്ച്, യുഎസ്എ, സെൻ്റ്. ).യുഎസ്എ) മൈക്രോ എയറോബിക് സാഹചര്യങ്ങളിൽ.സംഗമിക്കുന്ന ട്രോഫോസോയിറ്റുകൾ ഐസിൽ ശേഖരിക്കുകയും കൂടുതൽ പുനരുൽപാദനത്തിനായി 1:4 എന്ന അനുപാതത്തിൽ കടന്നുപോകുകയും ചെയ്തു.
മുമ്പ് വിവരിച്ചതുപോലെ ജിയാർഡിയ ഡുവോഡിനം സിസ്റ്റുകൾ പ്രേരിപ്പിച്ചു [23], ട്രോഫോസോയിറ്റുകൾ ലോഗരിഥമിക് ഘട്ടത്തിൽ വിളവെടുക്കുകയും പിന്നീട് 1 × 106 ട്രോഫോസോയിറ്റുകൾ/mL എന്ന അന്തിമ സാന്ദ്രതയിലേക്ക് പിഎച്ച് 7.1 (പരിഷ്‌കരിച്ച TYI-S-33) എൻക്യാപ്‌സുലേഷൻ ഇൻഡുസിംഗ് മീഡിയം ഉപയോഗിച്ച് ലയിപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു.പിത്തരസം സാന്ദ്രത 0.05% ഇടത്തരം).ലോഗരിതമിക് വളർച്ചാ ഘട്ടം വരെ 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ വായുരഹിത സാഹചര്യങ്ങളിൽ ട്രോഫോസോയിറ്റുകൾ സംസ്ക്കരിച്ചു.സിസ്റ്റത്തെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്ന മീഡിയത്തിലേക്ക് മീഡിയം മാറ്റുക (pH 7.8; പരിഷ്കരിച്ച TYI-S-33 മീഡിയം 1% പിത്തരസം സാന്ദ്രത) കൂടാതെ 48-96 മണിക്കൂർ 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ജി.ഭൂരിഭാഗം ട്രോഫോസോയിറ്റുകളും സിസ്റ്റുകൾ രൂപപ്പെടാൻ പ്രേരിപ്പിച്ചതിനുശേഷം, കൾച്ചർ മിശ്രിതം വിളവെടുക്കുകയും ബാക്കിയുള്ള ട്രോഫോസോയിറ്റുകളെ ലൈസ് ചെയ്യുന്നതിനായി അണുവിമുക്തമായ ഡീയോണൈസ്ഡ് വെള്ളത്തിൽ വീണ്ടും ചേർക്കുകയും ചെയ്തു.എലികളിലെ ഗ്യാസ്ട്രിക് ട്യൂബിലൂടെ തുടർന്നുള്ള വിശകലനങ്ങൾക്കായി സിസ്റ്റുകൾ കണക്കാക്കി 4 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ സംഭരിച്ചു.
ജിയാർഡിയ എക്സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ വെസിക്കിളുകൾ (ജിഇവി) മുമ്പ് വിവരിച്ചതുപോലെ സമ്പുഷ്ടമാക്കി [13].ലോഗരിഥമിക് വളർച്ചാ ഘട്ടത്തിലെ ട്രോഫോസോയിറ്റുകൾ പരിഷ്കരിച്ച TYI-S-33 മീഡിയത്തിൽ എക്സോസോം-ഡീപ്ലീറ്റഡ് FBS (ബയോളജിക്കൽ ഇൻഡസ്ട്രീസ്, ബീറ്റ്-ഹേമെക്, ഇസ്രായേൽ) ഉപയോഗിച്ച് 1 × 106 പരാന്നഭോജികൾ/mL എന്ന അന്തിമ സാന്ദ്രതയിലേക്ക് പുനഃസ്ഥാപിക്കുകയും 12 മണിക്കൂർ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു.10 മിനിറ്റിന് 2000 ഗ്രാം, 45 മിനിറ്റിന് 10,000 ഗ്രാം, 60 മിനിറ്റിന് 100,000 ഗ്രാം എന്നിങ്ങനെയുള്ള സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ വഴി കൾച്ചർ സൂപ്പർനാറ്റൻ്റിൽ നിന്ന് വേർതിരിച്ചെടുത്തു.ഒരു BCA പ്രോട്ടീൻ അസ്സെ കിറ്റ് (തെർമോ ഫിഷർ സയൻ്റിഫിക്, വാൽതം, MA, USA) ഉപയോഗിച്ച് അളവ് കണക്കാക്കി -80° C. അല്ലെങ്കിൽ കൂടുതൽ വിശകലനങ്ങൾക്കായി നേരിട്ട് ഉപയോഗിച്ചോ ഫോസ്ഫേറ്റ് ബഫർഡ് സലൈനിൽ (PBS) അവശിഷ്ടങ്ങൾ ലയിപ്പിച്ചു.
പ്രൈമറി മൗസ് പെരിറ്റോണിയൽ മാക്രോഫേജുകൾ മുമ്പ് വിവരിച്ചതുപോലെ തയ്യാറാക്കിയിട്ടുണ്ട് [24].ചുരുക്കത്തിൽ, എലികൾക്ക് (6-8 ആഴ്‌ച പ്രായമുള്ള) (ഇൻട്രാപെരിറ്റോണിയൽ [ip]) 2.5 മില്ലി 2.98% ഡിഫ്‌കോ ലിക്വിഡ് തിയോഗ്ലൈക്കോൾ മീഡിയം (ബിഡി, ഫ്രാങ്ക്ലിൻ ലേക്‌സ്, എൻജെ, യുഎസ്എ) കുത്തിവയ്ക്കുകയും 3-4 അണ്ണാക്ക് നൽകുകയും ചെയ്തു.ദയാവധത്തിന് ശേഷം എലികളുടെ വയറിലെ അറയിൽ നിന്ന് മാക്രോഫേജുകളുടെ ഒരു സസ്പെൻഷൻ ശേഖരിക്കുകയും 10 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് 1000 ഗ്രാം 3 തവണ സെൻ്റീഫ്യൂജ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു.കോശശുദ്ധി >98% ആകുന്നതുവരെ CD11b മാർക്കർ ഉപയോഗിച്ച് ഫ്ലോ സൈറ്റോമെട്രി ഉപയോഗിച്ച് വിളവെടുത്ത കോശങ്ങൾ കണ്ടെത്തി, തുടർന്ന് 6-കിണർ സെൽ കൾച്ചർ പ്ലേറ്റുകളിലേക്ക് (4.5 x 106 സെല്ലുകൾ/കിണർ) ചേർക്കുകയും 37°C താപനിലയിൽ 10% FBS (Bioindustry) ഉപയോഗിച്ച് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു.കൂടാതെ 5% CO2.
1 ml TRIzol reagent (Vazyme, Nanjing, China) ൽ 1 × 107 ട്രോഫോസോയിറ്റുകളിൽ നിന്ന് RNA വേർതിരിച്ചെടുത്തു, MonScript dsDNase (Monad, Wuhan, China) ഉപയോഗിച്ച് മൊത്തത്തിലുള്ള G. duodenalis RNA-യിൽ നിന്ന് ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കുകയും കോംപ്ലിമെൻ്ററി DNA (cDNA) സമന്വയിപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു. നിർമ്മാതാവിൻ്റെ നിർദ്ദേശങ്ങൾ അനുസരിച്ച് മോൺസ്ക്രിപ്റ്റ് RTIIII സൂപ്പർ മിക്സ് (മോണാഡ്) ഉപയോഗിക്കുന്നു.
ടാർഗെറ്റ് ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് ജീനിനായുള്ള സിഡിഎസ് സീക്വൻസ് വിവരങ്ങൾ എൻസിബിഐ ജെൻബാങ്കിൽ നിന്ന് ലഭിച്ചു.ഓരോ ടാർഗെറ്റ് ജീനിനും പ്രത്യേക തടസ്സമില്ലാത്ത ക്ലോണിംഗ് പ്രൈമറുകൾ രൂപകൽപ്പന ചെയ്യാൻ പ്രൈമർ 5.0 ഉപയോഗിക്കുക.ഫോർവേഡ് പ്രൈമറിൽ (5′-3′) മൂന്ന് ഭാഗങ്ങൾ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു: ഒരു ലീനിയറൈസ്ഡ് വെക്റ്റർ pcDNA3.1(+) EcoRV (TGGTGGAATTCTGCAGAT) ഉള്ള ഒരു ഓവർലാപ്പിംഗ് സീക്വൻസ്, ATG, GNN എന്നീ കോഡണുകൾ ആരംഭിക്കുക (ആദ്യത്തെ അടിസ്ഥാനം G അല്ലെങ്കിൽ).പദപ്രയോഗത്തിൻ്റെ കാര്യക്ഷമത മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നതിനാണ് ഇത് ചെയ്യുന്നത്.കൂടാതെ, കുറഞ്ഞത് 16 ബിപി സംയോജിത അടിത്തറകൾ (ജിസി ഉള്ളടക്കം 40-60%/Tm ഏകദേശം 55 °C).റിവേഴ്സ് പ്രൈമർ (5′-3′) രണ്ട് ഭാഗങ്ങൾ ഉൾക്കൊള്ളുന്നു, ഒരു EcoRV-ലീനിയറൈസ്ഡ് വെക്റ്റർ pcDNA3.1(+) (GCCGCCACTGTGCTGGAT) ഉള്ള ഒരു ഓവർലാപ്പിംഗ് സീക്വൻസും കുറഞ്ഞത് 16 bp യുടെ ഒരു സംയുക്ത അടിത്തറയും.(അവസാന രണ്ട് സ്റ്റോപ്പുകൾ ഒഴികെ).അടിസ്ഥാനങ്ങൾ) റീകോമ്പിനൻ്റ് പ്ലാസ്മിഡുകൾക്ക് അവയുടെ ലേബൽ ചെയ്ത പ്രോട്ടീനുകൾ പ്രകടിപ്പിക്കാൻ അനുവദിക്കുന്നതിന് AA അല്ലെങ്കിൽ GA പോലുള്ള ഒരു കോഡൺ).പ്രൈമർ സീക്വൻസുകൾ പട്ടിക 1-ൽ പട്ടികപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്, അവ സമന്വയിപ്പിച്ചത് കാങ്‌മെറ്റ് ബയോടെക്‌നോളജി കോ, ലിമിറ്റഡ് (ചാങ്‌ചുൻ, ചൈന) ആണ്.
തയ്യാറാക്കിയ G. duodenalis cDNA ഒരു ടെംപ്ലേറ്റായി ഉപയോഗിച്ച് Pfu DNA പോളിമറേസ് (Tiangen, Beijing, China) അല്ലെങ്കിൽ Ex-taq (Takara Biomedical Technology [Beijing] Co., Ltd., Beijing, China) ഉപയോഗിച്ച് ടാർഗെറ്റുകൾ വർദ്ധിപ്പിച്ചു.EcoRV എന്ന നിയന്ത്രണ എൻസൈം ഉപയോഗിച്ച് യൂക്കറിയോട്ടിക് എക്സ്പ്രഷൻ വെക്റ്റർ പ്ലാസ്മിഡ് pcDNA3.1(+) രേഖീയമാക്കുകയും ഫാസ്റ്റ് എപി (തെർമോ ഫിഷർ സയൻ്റിഫിക്) ഉപയോഗിച്ച് ഡീഫോസ്ഫോറിലേറ്റ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു.ലീനിയറൈസ്ഡ് pcDNA3.1(+) ശകലങ്ങളും ആംപ്ലിഫൈഡ് ടാർഗെറ്റ് ജീൻ ശകലങ്ങളും DNA ജെൽ പ്യൂരിഫിക്കേഷൻ കിറ്റ് (Tiangen) ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരിക്കുകയും നാനോഡ്രോപ്പ് ND-2000 (തെർമോ ഫിഷർ സയൻ്റിഫിക്) ഉപയോഗിച്ച് അളക്കുകയും ചെയ്തു.മോൺക്ലോൺ സിംഗിൾ അസംബ്ലി ക്ലോണിംഗ് മിക്‌സ് (മോണാഡ് ബയോടെക് കോ. ലിമിറ്റഡ്, സുഷൗ, ചൈന) ഉപയോഗിച്ച് pcDNA3.1(+) ശകലവും ഓരോ ടാർഗെറ്റ് ജീൻ ശകലവും പുനഃസംയോജിപ്പിച്ച് കോമേറ്റ് ബയോസയൻസ് കമ്പനി ലിമിറ്റഡ് (ചാങ്‌ചുൻ, ചൈന) ഉപയോഗിച്ച് ഡിഎൻഎ സീക്വൻസിംഗിലൂടെ സ്ഥിരീകരിച്ചു..
എൻഡോടോക്സിൻ രഹിത പ്ലാസ്മിഡുകൾ pcDNA3.1(+)-alpha-2, pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 എന്നിവ SanPrep Endotoxin-free Plasmid Mini Kit (Sangon Biotech) ഉപയോഗിച്ചാണ് നിർമ്മിച്ചത്.എല്യൂഷൻ ബഫറിലെ EDTA ട്രാൻസ്‌ഫെക്ഷൻ അസെയിൽ ഇടപെടുന്നില്ലെന്ന് ഉറപ്പാക്കാൻ കോൺസൺട്രേഷൻ 500 ng/µl-ന് മുകളിൽ നിലനിർത്തി.പ്രാഥമിക മൗസ് പെരിറ്റോണിയൽ മാക്രോഫേജുകൾ 12 മണിക്കൂർ പൂർണ്ണമായ ആർപിഎംഐ 1640 മീഡിയം (ബയോളജിക്കൽ ഇൻഡസ്ട്രീസ്) ഉപയോഗിച്ച് 6-കിണർ പ്ലേറ്റുകളിൽ സംസ്ക്കരിച്ചു, തുടർന്ന് പെൻസിലിൻ, സ്ട്രെപ്റ്റോമൈസിൻ എന്നിവ നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി കോശങ്ങൾ 3 തവണ ചൂടുള്ള പിബിഎസിൽ കഴുകി, തുടർന്ന് മീഡിയത്തിൽ പൂർണ്ണമായ മീഡിയം സപ്ലിമെൻ്റ് ചെയ്തു.എൻഡോടോക്സിൻ രഹിത പ്ലാസ്മിഡുകൾ pcDNA3.1(+)-alpha-2, pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (2.5 μg) എന്നിവ 125 μl Opti-MEM കുറച്ച സെറം മീഡിയത്തിൽ (ഗിബ്‌കോ, തെർമോ ഫിഷർ സയൻ്റിഫിക്) നേർപ്പിച്ചു..തുടർന്ന് 5 µl Lipofectamine 2000 ട്രാൻസ്‌ഫെക്ഷൻ റിയാജൻ്റ് (ഇൻവിട്രോജൻ, തെർമോ ഫിഷർ സയൻ്റിഫിക്) 125 µl ലോ സെറം Opti-MEM മീഡിയത്തിൽ ലയിപ്പിച്ചു.ലയിപ്പിച്ച എൻഡോടോക്സിൻ രഹിത പ്ലാസ്മിഡ് ലിപോഫെക്റ്റാമൈൻ 2000-മായി കലർത്തി, മിശ്രിതം 5 മിനിറ്റ് ഊഷ്മാവിൽ നിൽക്കാൻ അനുവദിച്ചുകൊണ്ട് ലിപ്പോസോം-ഡിഎൻഎ കോംപ്ലക്സുകൾ തയ്യാറാക്കുക.ഓരോ കിണറിലെയും സെല്ലുകളിലേക്ക് കോംപ്ലക്സുകൾ വെവ്വേറെ മാറ്റി പതുക്കെ ഇളക്കുക.4 മണിക്കൂറിന് ശേഷം, സെൽ കൾച്ചർ മീഡിയം 2 മില്ലി പൂർണ്ണമായ RPMI 1640 മീഡിയം ഉപയോഗിച്ച് മാറ്റി, 24 മണിക്കൂർ കൾച്ചർ തുടർന്നു.ഫ്രഷ് സെൽ കൾച്ചർ മീഡിയം സെല്ലുകളിലേക്ക് ചേർക്കുകയും പരിശോധനാ രൂപകൽപ്പനയെ ആശ്രയിച്ച് വിവിധ സമയ പോയിൻ്റുകൾക്കായി ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു.
സൂപ്പർനാറ്റൻ്റുകളിൽ നിന്നും സെൽ ലൈസേറ്റുകളിൽ നിന്നുമുള്ള പ്രോട്ടീൻ സാമ്പിളുകൾ മുമ്പ് വിവരിച്ചതുപോലെ തയ്യാറാക്കിയിട്ടുണ്ട് [25].pro-IL-1β, pro-caspase-1, caspase-1 p20, NLRP3, β-actin, His-tag എന്നിവയ്ക്കുള്ള മെംബ്രൺ ട്രാൻസ്ഫർ പാരാമീറ്ററുകൾ 200 mA/90 മിനിറ്റ് ആയിരുന്നു.ഇൻ്റർല്യൂക്കിൻ 1β (IL-1β; R&D സിസ്റ്റംസ്, മിനിയാപൊളിസ്, മിനസോട്ട, യുഎസ്എ), കാസ്‌പേസ്-1 (p20) (അഡിപോജൻ, സ്വിറ്റ്‌സർലൻഡ്), NLRP3 (Adipogen SA, Epalinges, Switzerland) കൂടാതെ 1:5000, അവൻ്റെ Scient, ടാർഗെറ്റിംഗ് വുഹാൻ, ചൈന), β- ആക്റ്റിൻ (പ്രോട്ടീൻടെക്, വുഹാൻ, ചൈന).
ഡിസുസിനിമൈഡ് സബറേറ്റ് (ഡിഎസ്എസ്) ഉപയോഗിച്ചുള്ള ക്രോസ്-ലിങ്കിംഗ് മുമ്പ് വിവരിച്ചതുപോലെ നടത്തി [26].കോശങ്ങൾ തണുത്ത PBS ഉപയോഗിച്ച് 3 തവണ കഴുകി, 25 mM Na2PO4, 187.5 mM NaCl, 25 mM HEPES, 125 mM NaHCO3 എന്നിവ അടങ്ങിയ 50 µl ASC റിയാക്ഷൻ ബഫറിൽ (pH 8.0) 27 ഗേജ് സൂചി ഉപയോഗിച്ച് പൂർണ്ണമായും ലൈസ് ചെയ്തു.മിശ്രിതം 3 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് 5000 ഗ്രാം സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്തു, പെല്ലറ്റ് 10 µl DSS (DMSO-ൽ 25 mM), 40 µl ASC റിയാക്ഷൻ ബഫർ എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് 30 മിനിറ്റ് 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ തുന്നിക്കെട്ടി.10 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് 5000 ഗ്രാം സെൻ്റീഫ്യൂഗേഷനുശേഷം, 40 µl ASC റിയാക്ഷൻ ബഫറിൻ്റെയും 10 µl 6x പ്രോട്ടീൻ ലോഡിംഗ് ബഫറിൻ്റെയും (TransGen, Beijing, China) ലായനിയിൽ പെല്ലറ്റ് അലിയിച്ചു, തുടർന്ന് 15-ന് ഊഷ്മാവിൽ ലായനി കെടുത്തി. മിനിറ്റ്, പിന്നെ 10 മിനിറ്റ് തിളപ്പിക്കുക.പ്രോട്ടീൻ സാമ്പിളുകൾ 1:500 എന്ന നേർപ്പിക്കൽ അനുപാതത്തിൽ പ്രാഥമിക ASC വിരുദ്ധ ആൻ്റിബോഡികൾ (വാൻലീബിയോ, ഷെന്യാങ്, ചൈന) ഉപയോഗിച്ച് വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗിന് വിധേയമാക്കി.
മുമ്പ് വിവരിച്ച നടപടിക്രമം [13] പിന്തുടർന്ന്, സെൽ കൾച്ചർ സൂപ്പർനാറ്റൻ്റുകളെ വിളവെടുക്കുകയും, മൗസ് IL-1 ബീറ്റ ELISA കിറ്റ് (ഇൻവിട്രോജൻ, തെർമോ ഫിഷർ സയൻ്റിഫിക്) ഉപയോഗിച്ച് പ്രോ-ഇൻഫ്ലമേറ്ററി സൈറ്റോകൈൻ IL-1β ൻ്റെ സ്രവണം നിർണ്ണയിക്കുകയും ചെയ്തു.IL-1β സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് ഉപയോഗിച്ച് OD450nm മൂല്യങ്ങളെ പ്രോട്ടീൻ സാന്ദ്രതയിലേക്ക് പരിവർത്തനം ചെയ്യുക.
കവർസ്ലിപ്പിൽ പൊതിഞ്ഞ കോശങ്ങൾ ഊഷ്മളമായ പിബിഎസിൽ 3 തവണ കഴുകി, ടിഷ്യൂ സെൽ ഫിക്സേറ്റീവ് (ബയോഷാർപ്പ്, ബീജിംഗ്, ചൈന) 10 മിനിറ്റ് ഊഷ്മാവിൽ (ആർടി), 0.1% ട്രൈറ്റൺ എക്സ്-പെർമീബിലൈസ് 100-ൽ (പിബിഎസിൽ നേർപ്പിച്ചത്; ബയോഷാർപ്പ്; ബയോഷാർപ്പ്) ) ഊഷ്മാവിൽ 20 മിനിറ്റ്, ഊഷ്മാവിൽ 2 മണിക്കൂർ 5% ബോവിൻ സെറം ആൽബുമിൻ (PBS-ൽ) തടയുക.യഥാക്രമം ASC (1:100 നേർപ്പിക്കൽ) അല്ലെങ്കിൽ NLRP3 (1:100 നേർപ്പിക്കൽ) എന്നിവയ്‌ക്കെതിരായ പ്രാഥമിക ആൻ്റിബോഡികൾ ഉപയോഗിച്ച് കോശങ്ങൾ 4 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ഒറ്റരാത്രികൊണ്ട് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു, കൂടാതെ Cy3 ആട് ആൻ്റി-റാബിറ്റ് IgG(H+L) (1:400; EarthOx) എന്ന് ലേബൽ ചെയ്തു. , San Francisco, CA, USA) അല്ലെങ്കിൽ FITC-കൺജഗേറ്റഡ് ആട് ആൻ്റി മൗസ് IgG (1:400; Earthox) രാത്രിയിൽ 37°C യിൽ 1 മണിക്കൂർ ഇരുട്ടിൽ.ന്യൂക്ലിയസുകൾ 5 മിനിറ്റ് നേരം Hoechst 33258 (10 μg/ml; UE, Suzhou, ചൈന) ഉപയോഗിച്ച് കളങ്കപ്പെടുത്തുകയും ഫ്ലൂറസെൻസ് മൈക്രോസ്കോപ്പിന് കീഴിൽ നിരീക്ഷിക്കുകയും ചെയ്തു (ഒളിമ്പസ് കോർപ്പറേഷൻ, ടോക്കിയോ, ജപ്പാൻ).
എലികളെ നാല് ഗ്രൂപ്പുകളായി തിരിച്ചിരിക്കുന്നു (ഓരോ ഗ്രൂപ്പിലും n = 7): (i) PBS-ചികിത്സ നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പ് (PBS മാത്രം; ഗവേജ് 100 µl/മൗസ് PBS തുടർന്ന് ദിവസേനയുള്ള ഇൻട്രാപെരിറ്റോണിയൽ കുത്തിവയ്പ്പ് 100 µl/മൗസ് PBS 3 മണിക്കൂർ കഴിഞ്ഞ്) ., തുടർച്ചയായി 7 ദിവസം);(ii) MCC950 ഇൻഹിബിറ്റർ [27] ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിക്കുന്ന നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പ് (100 µl/മൗസ് PBS ഗേവേജ് വഴി, 3 മണിക്കൂറിന് ശേഷം, 10 mg/kg ശരീരഭാരം [BW] MCC950 [PBS-ൽ] ദിവസേന ഇൻട്രാപെരിറ്റോണായി നൽകപ്പെട്ടു, ദൈർഘ്യം 7 ദിവസം);(iii) ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് സിസ്റ്റ് ഇൻഫെക്ഷൻ ഗ്രൂപ്പ് (1.5 x 106 സിസ്റ്റുകൾ/മൗസ് ഗേവേജ്, 3 മണിക്കൂറിന് ശേഷം, 100 μl/മൗസ് പിബിഎസ് ഇൻട്രാപെറിറ്റോണായി 7 ദിവസത്തേക്ക് ദിവസവും നൽകപ്പെടുന്നു);(iv) ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് സിസ്റ്റ് സംയോജിത അണുബാധ ഗ്രൂപ്പ് MCC950 ഇൻഹിബിറ്റർ ട്രീറ്റ്മെൻ്റ് ഗ്രൂപ്പ് (1.5×106 സിസ്റ്റുകൾ/ഗേവേജ് വഴിയുള്ള മൗസ്, 10mg/kg ശരീരഭാരം MCC950 ഇൻട്രാപെരിറ്റോണായി ദിവസേന 3മണിക്ക്).ഓരോ എലിയുടെയും ശരീരഭാരം ദിവസവും നിരീക്ഷിക്കുകയും ഏഴാം ദിവസം എല്ലാ എലികളെയും ദയാവധം ചെയ്യുകയും ചെയ്തു.വിളവെടുത്ത ഡുവോഡിനം (3 സെൻ്റീമീറ്റർ നീളം) 1 മില്ലി പിബിഎസിൽ ചെറിയ കഷണങ്ങളാക്കി, 4 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ പിബിഎസിൽ ഒറ്റരാത്രികൊണ്ട് സിസ്റ്റുകൾ നശിപ്പിക്കപ്പെട്ടു, ജി.ഹെമറ്റോക്‌സിലിൻ, ഇയോസിൻ (H&E) സ്റ്റെയിനിംഗിനായി പുതിയ ഡുവോഡിനം (1 സെ.മീ നീളം) വേർതിരിച്ചു.
എലികളെ രണ്ട് ഗ്രൂപ്പുകളായി തിരിച്ചിരിക്കുന്നു: (i) MOCK കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പും (ii) MCC950 ഇൻഹിബിറ്റർ ഗ്രൂപ്പും.ഓരോ ഗ്രൂപ്പിലും അഞ്ച് ചികിത്സകൾ ഉണ്ടായിരുന്നു (n = 7/ട്രീറ്റ്മെൻ്റ് ഗ്രൂപ്പ്): (i) PBS ചികിത്സ നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പ് (PBS മാത്രം; 100 µl/mouse PBS, intramuscular (IM) കുത്തിവയ്പ്പ് (tibialis anterior) [28, 29] ;( ii) pcDNA3.1(+) പ്ലാസ്മിഡ് നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പ് (100 µg/മൗസ് DNA, ഇൻട്രാമുസ്‌കുലർ ഇൻജക്ഷൻ വഴി); പ്ലാസ്മിഡ് pcDNA3.1(+)-alpha-2 (100 μg/mouse DNA, intramuscular injection വഴി), (v) പ്ലാസ്മിഡ് pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (100 µg/mouse) ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിക്കുന്ന ഗ്രൂപ്പ് ഡിഎൻഎ, 12 മണിക്കൂർ കടന്നുപോയതിന് ശേഷം, MCC950 ഇൻഹിബിറ്റർ ഗ്രൂപ്പിലെ എലികൾക്ക് 7 ദിവസത്തേക്ക് MCC950 (10 mg/kg ശരീരഭാരം) ദിവസേനയുള്ള ഇൻട്രാപെറിറ്റോണിയൽ കുത്തിവയ്പ്പ് ലഭിച്ചു, അതേസമയം MOCK ഗ്രൂപ്പിലെ എലികൾക്ക് തുല്യ അളവിൽ PBS ചികിത്സ ലഭിച്ചു. രക്ത സാമ്പിളുകൾ ഐബോൾ എലികളിൽ നിന്ന് ശേഖരിച്ച് 4 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ഒറ്റരാത്രികൊണ്ട് സെറം സാമ്പിളുകൾ എൻസൈം-ലിങ്ക്ഡ് ഇമ്മ്യൂണോസോർബൻ്റ് അസ്സെ (ELISA) ഉപയോഗിച്ച് IL-1β ലെവലുകൾക്കായി വേർതിരിച്ചു.
മുപ്പത്തിയഞ്ച് എലികളെ അഞ്ച് ഗ്രൂപ്പുകളായി തിരിച്ചിരിക്കുന്നു (n=7/ഗ്രൂപ്പ്).ഗ്രൂപ്പ് 1 പിബിഎസ് ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിക്കുന്ന ഒരു നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പായിരുന്നു: എലികൾക്ക് 100 μl പിബിഎസ് ഇൻട്രാമുസ്കുലറായും 3 ദിവസത്തിന് ശേഷം ഗേവേജ് വഴിയും ലഭിച്ചു.G. ഡുവോഡിനാലിസ് സിസ്റ്റുകൾ ബാധിച്ച ഒരു പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പാണ് ഗ്രൂപ്പ് 2: എലികൾക്ക് 100 μl PBS കുത്തിവയ്‌ക്കുകയും 3 ദിവസത്തിന് ശേഷം 1.5 x 106 സിസ്റ്റുകൾ/മൗസ് ഇൻട്രാഗാസ്‌ട്രിക് ആയി കുത്തിവയ്ക്കുകയും ചെയ്തു.മൂന്നാമത്തെ ഗ്രൂപ്പ് - ഡുവോഡിനൽ സിസ്റ്റ് അണുബാധയ്ക്കുള്ള ഒരു കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പുമായി ചേർന്ന് pcDNA3.1 (+) ഉപയോഗിച്ചുള്ള പ്ലാസ്മിഡ് പ്രതിരോധ കുത്തിവയ്പ്പ്: എലികൾക്ക് 100 μg പ്ലാസ്മിഡ് ഡിഎൻഎ pcDNA3.1(+)(im) വാമൊഴിയായി, 1.5×106 സിസ്റ്റുകൾ/മൗസ് 3 ലഭിച്ചു. ദിവസങ്ങളിൽ.ഗ്രൂപ്പുകൾ 4 ഉം 5 ഉം പിസിഡിഎൻഎ3.1(+)-ആൽഫ-2 ജിയാർഡിൻ പ്ലാസ്മിഡ് അല്ലെങ്കിൽ പിസിഡിഎൻഎ3.1(+)-ആൽഫ-7.3 ജിയാർഡിൻ പ്ലാസ്മിഡ്, ജി.പരീക്ഷണാത്മക ഗ്രൂപ്പ്: എലികൾക്ക് 100 μg pcDNA3 ലഭിച്ചു.1(+)-ജിയാർഡിൻ പ്ലാസ്മിഡ് ഡിഎൻഎ (im), തുടർന്ന് 3 ദിവസങ്ങൾക്ക് ശേഷം, 1.5 × 106 സിസ്റ്റുകൾ/മൗസ് ഗേവേജ് വഴി കുത്തിവച്ചു.ട്യൂബ് വഴി ജി ഡുവോഡിനാലിസ് സിസ്റ്റ് അവതരിപ്പിച്ചതിന് ശേഷം ഓരോ എലിയുടെയും ശരീരഭാരം നിരീക്ഷിച്ചു.പരാന്നഭോജികളുടെ ലോഡ് അളവുകൾക്കും HE സ്റ്റെയിനിംഗ് വിശകലനത്തിനുമായി പുതിയ ഡുവോഡിനം ശേഖരിച്ചു.
മുമ്പ് പ്രസിദ്ധീകരിച്ച നടപടിക്രമം അനുസരിച്ച് ഹിസ്റ്റോപഥോളജിക്കൽ മാറ്റങ്ങൾ വിശകലനം ചെയ്തു [30].പുതിയ ഡുവോഡിനം ടിഷ്യു സെൽ ഫിക്സേറ്റീവ് ഉപയോഗിച്ച് ഉറപ്പിച്ചു, പാരഫിനിൽ ഉൾപ്പെടുത്തി, 4 μm ഭാഗങ്ങളായി മുറിച്ച്, H&E ഉപയോഗിച്ച് സ്റ്റെയിൻ ചെയ്ത് ഒരു ലൈറ്റ് മൈക്രോസ്കോപ്പിന് കീഴിൽ വിശകലനം ചെയ്തു.ഏഴ് സ്വതന്ത്ര എലികളിൽ നിന്നുള്ള ഏഴ് ടിഷ്യൂ വിഭാഗങ്ങളിലെ പ്രാതിനിധ്യമായ പാത്തോളജിക്കൽ മാറ്റങ്ങൾ ചികിത്സയെക്കുറിച്ച് അറിയാത്ത ഒരു പാത്തോളജിസ്റ്റ് വിലയിരുത്തി, 200x മാഗ്നിഫിക്കേഷനിൽ പിടിച്ചെടുത്തു.മുമ്പ് വിവരിച്ച രീതികൾക്ക് അനുസൃതമായി വില്ലിയുടെ നീളവും ക്രിപ്റ്റുകളുടെ ആഴവും അളന്നു.
വിട്രോയിലെയും ഇൻ വിവോയിലെയും ഫലങ്ങൾ മൂന്ന് തവണയായി ലഭിച്ചു.ഗ്രാഫ്‌പാഡ് പ്രിസം 7.00 (ഗ്രാഫ്‌പാഡ് സോഫ്റ്റ്‌വെയർ ഇൻക്., ലാ ജൊല്ല, സിഎ, യുഎസ്എ) ഉപയോഗിച്ചാണ് ഗ്രാഫുകൾ സൃഷ്‌ടിച്ചത്.രണ്ട് ഗ്രൂപ്പുകൾ തമ്മിലുള്ള വ്യത്യാസങ്ങൾ ടി-ടെസ്റ്റ് വഴി വിശകലനം ചെയ്തു, അതേസമയം ≥3 ഗ്രൂപ്പുകൾ തമ്മിലുള്ള വ്യത്യാസങ്ങൾ SPSS സോഫ്റ്റ്‌വെയർ (പതിപ്പ് 22.0; SPSS IBM Corp., Armonk, NY, USA) ഉപയോഗിച്ച് വൺ-വേ അനാലിസിസ് ഓഫ് വേരിയൻസ് (ANOVA) ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്തു.ലെവൻ്റെ ടെസ്റ്റും തുടർന്ന് ബോൺഫെറോണിയുടെ പോസ്റ്റ് ഹോക്ക് ടെസ്റ്റും (ബി) ഉപയോഗിച്ച് വ്യത്യാസത്തിൻ്റെ ഏകതയ്ക്കായി ഡാറ്റ വിശകലനം ചെയ്തു.P<0.05, P<0.01, P<0.001 (പ്രധാനമല്ല [ns]) (P>0.05) എന്നിങ്ങനെയാണ് പ്രാധാന്യം പ്രകടിപ്പിക്കുന്നത്.
ക്യോട്ടോ എൻസൈക്ലോപീഡിയ ഓഫ് ജീൻസ് ആൻഡ് ജീനോംസിലെ (കെഇജിജി) GEV പ്രോട്ടിയോമിക്സിനെക്കുറിച്ചുള്ള ഞങ്ങളുടെ മുൻ വിശകലനം, കോശജ്വലന സിഗ്നലിംഗ് പാതകൾ സജീവമാക്കുന്നതിൽ നിരവധി ലക്ഷ്യങ്ങൾ ഉൾപ്പെട്ടിരിക്കാമെന്ന് കാണിക്കുന്നു [13].ആൽഫ-2, ആൽഫ-7.3 ജിയാർഡിനുകൾ എന്നീ രണ്ട് വാഗ്ദാനമായ ടാർഗെറ്റുകൾ ഞങ്ങൾ തിരഞ്ഞെടുത്തു, ഈ തന്മാത്രകൾ വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും pcDNA3.1(+) യൂക്കറിയോട്ടിക് എക്സ്പ്രഷൻ വെക്റ്റർ നിർമ്മിക്കാൻ അവ ഉപയോഗിക്കുകയുമാണ്.സീക്വൻസിംഗിന് ശേഷം, റീകോമ്പിനൻ്റ് pcDNA3.1(+)-ആൽഫ-2, ആൽഫ-7.3 ഗിയാർഡിൻ എക്സ്പ്രഷൻ പ്ലാസ്മിഡുകൾ എന്നിവ പ്രാഥമിക മൗസ് പെരിറ്റോണിയൽ മാക്രോഫേജുകളിലേക്ക് മാറ്റപ്പെട്ടു, കൂടാതെ കാസ്‌പേസ്-1 p20 സിഗ്നേച്ചർ പ്രോട്ടീൻ (സജീവമാക്കിയ കാസ്‌പേസ്-1 ൻ്റെ ഒരു ഭാഗം) തിരിച്ചറിഞ്ഞു. വീക്കം ട്രിഗർ ചെയ്യാൻ കഴിയുന്ന പ്രധാന തന്മാത്രകളെ വ്യക്തമാക്കുന്ന നിലയിൽ.ആൽഫ-2, ആൽഫ-7.3 ഗിയാർഡിനുകൾ എന്നിവയ്ക്ക് GEV-ന് സമാനമായ p20 കാസ്‌പേസ്-1 എക്‌സ്‌പ്രഷൻ ഉണ്ടാക്കാൻ കഴിയുമെന്ന് ഫലങ്ങൾ കാണിച്ചു.ചികിത്സിക്കാത്ത നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ (പിബിഎസ് മാത്രം), പ്ലാസ്മിഡ് കൺട്രോൾ pcDNA3.1(+) (ചിത്രം 1) എന്നിവയിൽ കാസ്‌പേസ്-1 ആക്ടിവേഷനിൽ ഒരു ഫലവും കണ്ടെത്തിയില്ല.
pcDNA3.1(+)-alpha-2, alpha-7.3 giardins എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് p20 കാസ്‌പേസ്-1 സജീവമാക്കൽ അളക്കൽ.റീകോമ്പിനൻ്റ് യൂക്കറിയോട്ടിക് എക്സ്പ്രഷൻ പ്ലാസ്മിഡുകൾ pcDNA3.1(+)-alpha-2, alpha-7.3 giardines (ഓരോ ലെയ്നിനും മുകളിൽ) പ്രൈമറി മൗസ് പെരിറ്റോണിയൽ മാക്രോഫേജുകളിലേക്ക് മാറ്റുകയും കൾച്ചർ സൂപ്പർനാറ്റൻ്റുകൾ 24 മണിക്കൂറിന് ശേഷം വിളവെടുക്കുകയും ചെയ്തു.സിഗ്നേച്ചർ കാസ്‌പേസ്-1 പി 20 ഇൻഫ്‌ളേമസം പ്രോട്ടീൻ്റെ എക്‌സ്‌പ്രഷൻ ലെവലുകൾ അളക്കാൻ വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗ് ഉപയോഗിച്ചു.PBS-ഒൺലി ട്രീറ്റ്‌മെൻ്റ് ഗ്രൂപ്പും (ലെയ്ൻ സി) pcDNA3.1(+) മോണോതെറാപ്പി ഗ്രൂപ്പും (pcDNA3.1 ലെയ്ൻ) നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണമായും GEV ട്രീറ്റ്മെൻ്റ് ഗ്രൂപ്പിനെ പോസിറ്റീവ് കൺട്രോളായും ഉപയോഗിച്ചു.ഓരോ പ്രോട്ടീനിലും ഒരു ഹിസ്റ്റിഡിൻ ടാഗ് കണ്ടെത്തി, ആൽഫ-2 ജിയാർഡിൻ (38.2 കെഡിഎ), ആൽഫ-7.3 ജിയാർഡിൻ (37.2 കെഡിഎ) എന്നിവയായിരുന്നു പ്രോട്ടീൻ ബാൻഡുകൾ.GEV, ജിയാർഡിയ ഡുവോഡിനം എക്സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ വെസിക്കിൾസ്, pcDNA3.1(+), EcoRV-ലീനിയറൈസ്ഡ് വെക്റ്റർ, SUP, സൂപ്പർനാറ്റൻ്റ്
ആൽഫ-2 ഗിയാർഡിനും ആൽഫ-7.3 ജിയാർഡിനും p20 കാസ്‌പേസ്-1 എക്‌സ്‌പ്രഷനും ഹോസ്‌റ്റ് NLRP3 കോശജ്വലന പ്രതികരണം സജീവമാക്കുന്നതിൽ പങ്ക് വഹിക്കുന്നുണ്ടോ എന്ന് നിർണ്ണയിക്കാൻ, pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine, pcDNA3.1(+)-alpha -7.3 ഗിയാർഡിൻ റീകോമ്പിനൻ്റ് പ്ലാസ്മിഡ് ഡിഎൻഎ ഉള്ള പ്രൈമറി മൗസ് പെരിറ്റോണിയൽ മാക്രോഫേജുകളിലേക്ക് മാറ്റപ്പെട്ടു, കൂടാതെ പ്രധാന കോശജ്വലന പ്രോട്ടീനുകളായ NLRP3 ൻ്റെ എക്സ്പ്രഷൻ, പ്രാദേശികവൽക്കരണം, ഒളിഗോമറൈസേഷൻ എന്നിവയുടെ അളവ് നിർണ്ണയിക്കപ്പെട്ടു.ഈ പരീക്ഷണത്തിൽ, GEV പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പായി ഉപയോഗിച്ചു, കൂടാതെ നോ ട്രീറ്റ്മെൻ്റ് ഗ്രൂപ്പും (PBS മാത്രം) അല്ലെങ്കിൽ pcDNA3.1(+) ട്രാൻസ്ഫെക്ഷൻ ട്രീറ്റ്മെൻ്റ് ഗ്രൂപ്പും നെഗറ്റീവ് ഗ്രൂപ്പായിരുന്നു.GEV ഗ്രൂപ്പിലെന്നപോലെ, ജിയാർഡിൻ pcDNA3.1(+)-alpha-2, giardin pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 എന്നിവയുടെ റീകോമ്പിനൻ്റ് പ്ലാസ്മിഡ് ഡിഎൻഎ എൻഎൽആർപി3, പ്രോ-ഐഎൽ-1β എന്നിവയുടെ നിയന്ത്രണത്തിൽ കലാശിച്ചതായി ഫലങ്ങൾ കാണിച്ചു. procaspase-1, caspase-1 ആക്ടിവേഷൻ (ചിത്രം 2a).കൂടാതെ, രണ്ട് ജിയാർഡൈനുകളും കാര്യമായ IL-1β സ്രവണം ഉണ്ടാക്കി (pcDNA3.1: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.1000; ആൽഫ-2 ജിയാർഡിൻ: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.00 ).;alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P<0.0001;GEV: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.0047) (ചിത്രം 2b).pcDNA3.1(+)-alpha-2 അല്ലെങ്കിൽ pcDNA3.1(+)-alpha- എന്നതിൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്തമായി, മിക്ക ASC പ്രോട്ടീനുകളും നോ-ട്രീറ്റ്മെൻ്റ് ഗ്രൂപ്പിലോ pcDNA3.1(+) പ്ലാസ്മിഡ് ഉപയോഗിച്ച് കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെട്ട ചികിത്സാ ഗ്രൂപ്പിലോ മോണോമെറിക് ആയിരുന്നു. 7.3 ജിയാർഡിൻ.GEV പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പിൻ്റെ അല്ലെങ്കിൽ ഗ്രൂപ്പിൻ്റെ റീകോമ്പിനൻ്റ് പ്ലാസ്മിഡ് ഡിഎൻഎയിൽ ASC ഒളിഗോമറൈസേഷൻ സംഭവിച്ചു, ഇത് ഒരു ഒളിഗോമെറിക് രൂപം കാണിക്കുന്നു (ചിത്രം 2c).ആൽഫ-2 ജിയാർഡിനും ആൽഫ-7,3 ജിയാർഡിനും എൻഎൽആർപി3 വീക്കം സജീവമാക്കാൻ പ്രേരിപ്പിക്കുമെന്ന് ഈ പ്രാഥമിക ഡാറ്റ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.ASC, NLRP3 എന്നിവയുടെ പ്രാദേശികവൽക്കരണത്തെക്കുറിച്ചുള്ള തുടർന്നുള്ള ഇമ്മ്യൂണോഫ്ലൂറസൻ്റ് പഠനങ്ങൾ കാണിക്കുന്നത്, നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പിൽ, ASC പ്രോട്ടീൻ സൈറ്റോപ്ലാസത്തിലുടനീളം ചിതറിക്കിടക്കുകയും, giardine അല്ലെങ്കിൽ pcDNA3 ഉപയോഗിച്ച് pcDNA3.1(+)-alpha-2 ഉത്തേജിപ്പിക്കുമ്പോൾ ഒരു ഡോട്ട് സിഗ്നലായി പ്രത്യക്ഷപ്പെടുകയും ചെയ്തു.1(+)-ആൽഫ-7,3 ജിയാർഡിൻ ഗ്രൂപ്പ് അല്ലെങ്കിൽ GEV പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പ് (ചിത്രം 2d).നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ, പ്ലാസ്മിഡ്-ട്രീറ്റ് ചെയ്ത pcDNA 3.1 ഗ്രൂപ്പുകളിൽ, NLRP3 പ്രോട്ടീൻ സിഗ്നൽ കണ്ടെത്തിയില്ല, അതേസമയം pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine അല്ലെങ്കിൽ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3-ന് പ്രതികരണമായി ഒരു ഫ്ലൂറസെൻ്റ് സിഗ്നൽ ഡോട്ട്. കണ്ടെത്തി..ജിയാർഡിൻ സൈറ്റോപ്ലാസത്തിലോ HEV യുടെ ഉത്തേജനത്തിലോ കാണപ്പെടുന്നു (ചിത്രം 2e).ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് ജിയാർഡിൻ ആൽഫ-2, ജിയാർഡിൻ ആൽഫ-7.3 എന്നിവ മൗസ് പ്രൈമറി പെരിറ്റോണിയൽ മാക്രോഫേജുകളിൽ എൻഎൽആർപി3 ഇൻഫ്‌ളമസോമിനെ സജീവമാക്കുന്നുവെന്ന് ഈ ഡാറ്റ കൂടുതൽ തെളിയിക്കുന്നു.
pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin, pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin എന്നിവ മൗസ് പെരിറ്റോണിയൽ മാക്രോഫേജുകളിൽ NLRP3 ഇൻഫ്ലമസമിനെ സജീവമാക്കുന്നു.പുനഃസംയോജിത യൂക്കറിയോട്ടിക് എക്സ്പ്രഷൻ പ്ലാസ്മിഡുകൾ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin, pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin എന്നിവ പ്രാഥമിക മ്യൂറിൻ പെരിറ്റോണിയൽ മാക്രോഫേജുകളിലേക്കും കോശങ്ങളിലേക്കും മാറ്റുക, അല്ലെങ്കിൽ പദപ്രയോഗം, ഒളിഗോമറൈസേഷൻ എന്നിവയുടെ വിശകലനത്തിനായി 24 മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ സൂപ്പർനാറ്റൻ്റ് വിളവെടുക്കുക. , സ്രവണം.പ്രധാന കോശജ്വലന പ്രോട്ടീനുകളുടെ പ്രാദേശികവൽക്കരണവും.PBS-only (C) ഗ്രൂപ്പും pcDNA3.1(+) സിംഗിൾ ട്രീറ്റ്‌മെൻ്റ് ഗ്രൂപ്പും നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണമായും GEV ട്രീറ്റ്‌മെൻ്റ് ഗ്രൂപ്പിനെ പോസിറ്റീവ് ഗ്രൂപ്പായും ഉപയോഗിച്ചു.എൻഎൽആർപി3, പ്രോ-ഐഎൽ-1β, പ്രോ-കാസ്‌പേസ്-1, പി20 കാസ്‌പേസ്-1 എന്നിവയുൾപ്പെടെ ഒരു പ്രധാന കോശജ്വലന പ്രോട്ടീനുകളായ എൻഎൽആർപി3, വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗ് വഴി കണ്ടെത്തി.b സൂപ്പർനാറ്റൻ്റുകളിലെ IL-1β ൻ്റെ സ്രവത്തിൻ്റെ അളവ് എൻസൈം-ലിങ്ക്ഡ് ഇമ്മ്യൂണോസോർബൻ്റ് അസ്സേ (ELISA) ഉപയോഗിച്ചാണ് നിർണ്ണയിക്കുന്നത്.നിയന്ത്രണവും പരീക്ഷണ ഗ്രൂപ്പുകളും തമ്മിലുള്ള വ്യത്യാസങ്ങൾ SPSS സോഫ്റ്റ്‌വെയർ പതിപ്പ് 22.0 ഉപയോഗിച്ച് വൺ-വേ അനാലിസിസ് ഓഫ് വേരിയൻസ് (ANOVA) ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്തു.**P<0.01, ***P<0.001 എന്നീ ഗ്രൂപ്പുകൾ തമ്മിലുള്ള കാര്യമായ വ്യത്യാസങ്ങൾ നക്ഷത്രചിഹ്നങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.സി പെല്ലറ്റുകളിലെ എഎസ്‌സി ഒലിഗോമറൈസേഷൻ ലെവലുകൾ ഡിഎസ്എസ് ക്രോസ്-ലിങ്കിംഗ് വിശകലനം വഴി നിർണ്ണയിച്ചു, അതേസമയം സെൽ ലൈസറ്റുകളിലെ എഎസ്‌സി ലെവലുകൾ ഒരു ലോഡിംഗ് നിയന്ത്രണമായി ഉപയോഗിച്ചു.d immunofluorescence ഉപയോഗിച്ച് ISC ലോക്കലൈസേഷൻ്റെ ദൃശ്യവൽക്കരണം.എൻഎൽആർപി3യുടെ പ്രാദേശികവൽക്കരണം ദൃശ്യവൽക്കരിക്കുന്നതിന് ഇമ്യൂണോഫ്ലൂറസെൻസ് ഉപയോഗിച്ചു.ASC, അപ്പോപ്‌ടോട്ടിക് സ്‌പെക്ക് പോലുള്ള പ്രോട്ടീൻ;IL, ഇൻ്റർലൂക്കിൻ;NLRP3, ന്യൂക്ലിയോടൈഡ്-ബൈൻഡിംഗ് ഒലിഗോമറൈസേഷൻ പോലുള്ള റിസപ്റ്റർ 3;ns, പ്രാധാന്യമില്ല (P > 0.05)
ജി. ഡുവോഡിനാലിസും അത് സ്രവിക്കുന്ന GEV-കളും NLRP3 കോശജ്വലനത്തെ സജീവമാക്കുകയും വിട്രോയിലെ കോശജ്വലന പ്രതികരണങ്ങളെ നിയന്ത്രിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.അതിനാൽ, ജി. ഡുവോഡിനാലിസിൻ്റെ രോഗകാരികളിൽ NLRP3 കോശജ്വലനത്തിൻ്റെ പങ്ക് അവ്യക്തമാണ്.ഈ പ്രശ്നം അന്വേഷിക്കാൻ, G. duodenalis cyst ബാധിച്ച എലികളും G. duodenalis cyst + MCC950 ഇൻഹിബിറ്റർ ചികിത്സ ബാധിച്ച എലികളും തമ്മിൽ ഒരു പരീക്ഷണം ഞങ്ങൾ രൂപകൽപ്പന ചെയ്‌തു.പരീക്ഷണത്തിൻ്റെ വിശദമായ സ്കീം ചിത്രം 3a ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു.വിവിധ ചികിത്സാ ഗ്രൂപ്പുകളിലെ എലികളുടെ ശരീരഭാരത്തിലെ മാറ്റങ്ങൾ സിസ്‌റ്റുകളുമായുള്ള അണുബാധയ്ക്ക് ശേഷം 7 ദിവസത്തേക്ക് നിരീക്ഷിച്ചു, ഫലങ്ങൾ ചിത്രം 3 ബിയിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു.ശുദ്ധമായ പിബിഎസ് ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിച്ച ഗ്രൂപ്പുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, ഫലങ്ങൾ കാണിക്കുന്നത് (i) G. duodenalis cyst ബാധിച്ച എലികളുടെ ശരീരഭാരം അണുബാധയ്ക്ക് ശേഷം 3-ാം ദിവസം മുതൽ 7-ാം ദിവസം വരെ കുറഞ്ഞു;(ii) MCC950 ഇൻഹിബിറ്റർ ഉപയോഗിച്ചുള്ള ചികിത്സ എലികളുടെ ശരീരഭാരത്തിൽ കാര്യമായ സ്വാധീനം ചെലുത്തിയില്ല..സിംഗിൾ ഇൻഫെക്ഷൻ ഗ്രൂപ്പുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, MCC950 ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിച്ച ഡുവോഡിനൽ അണുബാധ ഗ്രൂപ്പിൻ്റെ BW വ്യത്യസ്ത ഡിഗ്രികളായി കുറഞ്ഞു (ദിവസം 1: ANOVA, F(3, 24) = 1.885, P = 0.0148; ദിവസം 2: ANOVA, F( 3, 24 ) = 0.4602, P<0.0001; ദിവസം 3: ANOVA, F(3, 24) = 0.8360, P = 0.0010; ദിവസം 4: ANOVA, F(3, 24) = 1.683, P = 0.0052; (3, 24)=0.6497, P=0.0645; ദിവസം 6: ANOVA, F(3, 24)=5.457, P=0.0175; ദിവസം 7: ANOVA, F(3, 24) = 2.893, P = 0.0202).ഡുവോഡിനൽ അണുബാധയുടെ പ്രാരംഭ ഘട്ടത്തിൽ (2-4 ദിവസം) ഗണ്യമായ ഭാരം കുറയുന്നതിൽ നിന്ന് എൻഎൽആർപി 3 ഇൻഫ്ലമസോം എലികളെ സംരക്ഷിക്കുന്നുവെന്ന് ഈ ഡാറ്റ തെളിയിക്കുന്നു.തുടർന്ന് ഞങ്ങൾ ഡുവോഡിനൽ ലാവേജ് ദ്രാവകത്തിൽ ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് ട്രോഫോസോയിറ്റുകൾ കണ്ടെത്തുന്നതിന് ലക്ഷ്യമിട്ടു, ഫലങ്ങൾ ചിത്രം 3 സിയിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു.ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് സിസ്റ്റ് അണുബാധ ഗ്രൂപ്പുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, എൻഎൽആർപി 3 ഇൻഫ്‌ളമസോം (t(12) = 2.902, പി = 0.0133) തടഞ്ഞതിന് ശേഷം ഡുവോഡിനത്തിലെ ട്രോഫോസോയിറ്റുകളുടെ എണ്ണം ഗണ്യമായി വർദ്ധിച്ചു.PBS, MCC950 എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് മാത്രം ചികിത്സിച്ച നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, HE ഉപയോഗിച്ച് കറപിടിച്ച ഡുവോഡിനൽ ടിഷ്യുകൾ കാണിച്ചു: (i) ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് സിസ്റ്റ് അണുബാധ ഡുവോഡിനൽ വില്ലി (ANOVA, F(3, 24)=0.4903, P= 0.0488 ) കൂടാതെ ക്രിപ്റ്റ് അട്രോഫി (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0.0089);(ii) ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് സിസ്റ്റുകൾ ബാധിച്ച എലികളിൽ നിന്നുള്ള ഡുവോഡിനം, MCC950 ഇൻഹിബിറ്ററുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിക്കുന്നു.ഡുവോഡിനൽ വില്ലി കേടുപാടുകൾ സംഭവിച്ചു (ANOVA, F(3, 24) = 0.4903, P = 0.0144) അട്രോഫിയും ക്രിപ്റ്റ് ബ്രാഞ്ചിംഗും (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0, 0481) (ചിത്രം 3d- f) .ഈ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത്, ജി. ഡുവോഡിനാലിസിൻ്റെ രോഗകാരിത്വം കുറയ്ക്കുന്നതിൽ എൻഎൽആർപി 3 ഇൻഫ്ലമസോം ഒരു പങ്കുവഹിക്കുന്നു എന്നാണ്.
ജിയാർഡിയ ഡുവോഡിനം അണുബാധയിൽ NLRP3 കോശജ്വലനത്തിൻ്റെ പങ്ക്.ഡുവോഡിനോകോക്കൽ സിസ്റ്റുകൾ ഉപയോഗിച്ച് എലികൾക്ക് (iv) ശേഷം MCC950 (ip) ഉപയോഗിച്ചോ അല്ലാതെയോ ചികിത്സിച്ചു.PBS അല്ലെങ്കിൽ MCC950 ഉള്ള ഏക ചികിത്സാ ഗ്രൂപ്പുകൾ നിയന്ത്രണങ്ങളായി ഉപയോഗിച്ചു.പരീക്ഷണാത്മക ഗ്രൂപ്പും ചികിത്സാ രീതിയും.b വിവിധ ചികിത്സാ ഗ്രൂപ്പുകളിലെ എലികളുടെ ശരീരഭാരം 7 ദിവസത്തേക്ക് നിരീക്ഷിച്ചു.G. duodenalis അണുബാധ ഗ്രൂപ്പും G. duodenalis + MCC950 അണുബാധ ചികിത്സ ഗ്രൂപ്പും തമ്മിലുള്ള വ്യത്യാസം SPSS സോഫ്‌റ്റ്‌വെയർ പതിപ്പ് 22.0 ഉപയോഗിച്ച് ടി-ടെസ്റ്റിലൂടെ വിശകലനം ചെയ്തു.നക്ഷത്രചിഹ്നങ്ങൾ *P<0.05, **P<0.01, അല്ലെങ്കിൽ ***P<0.001 എന്നിവയിൽ കാര്യമായ വ്യത്യാസങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.c ഡുവോഡിനൽ ലാവേജ് ദ്രാവകത്തിലെ ട്രോഫോസോയിറ്റുകളുടെ എണ്ണം കണക്കാക്കിയാണ് പരാന്നഭോജികളുടെ ലോഡ് നിർണ്ണയിക്കുന്നത്.G. duodenalis അണുബാധ ഗ്രൂപ്പും G. duodenalis + MCC950 അണുബാധ ചികിത്സ ഗ്രൂപ്പും തമ്മിലുള്ള വ്യത്യാസം SPSS സോഫ്‌റ്റ്‌വെയർ പതിപ്പ് 22.0 ഉപയോഗിച്ച് ടി-ടെസ്റ്റിലൂടെ വിശകലനം ചെയ്തു.നക്ഷത്രചിഹ്നങ്ങൾ *P <0.05-ൽ കാര്യമായ വ്യത്യാസങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.d ഹെമറ്റോക്‌സിലിൻ, ഇയോസിൻ (H&E) സ്റ്റെയിനിംഗ് ഫലങ്ങൾ ഡുവോഡിനൽ ഹിസ്റ്റോപത്തോളജി.ചുവന്ന അമ്പടയാളങ്ങൾ വില്ലിനുണ്ടാകുന്ന നാശത്തെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു, പച്ച അമ്പുകൾ ക്രിപ്റ്റുകളുടെ കേടുപാടുകൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.സ്കെയിൽ ബാർ: 100 µm.e, f ഡുവോഡിനൽ വില്ലസ് ഉയരം, മൗസ് ക്രിപ്റ്റ് ഉയരം എന്നിവയുടെ സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ വിശകലനം.നക്ഷത്രചിഹ്നങ്ങൾ *P<0.05, **P<0.01 എന്നിവയിൽ കാര്യമായ വ്യത്യാസങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.7 സ്വതന്ത്ര ജൈവ പരീക്ഷണങ്ങളിൽ നിന്നാണ് ഫലങ്ങൾ എടുത്തത്.BW, ശരീരഭാരം;ig, ഇൻട്രാഗാസ്ട്രിക് ഡെലിവറി റൂട്ട്;ip, ഇൻട്രാപെരിറ്റോണിയൽ ഡെലിവറി റൂട്ട്;ns, പ്രധാനമല്ല (P > 0.05);പിബിഎസ്, ഫോസ്ഫേറ്റ് ബഫർഡ് സലൈൻ;WT, കാട്ടുതരം
IL-1β ൻ്റെ സ്രവണം വീക്കം സജീവമാക്കുന്നതിൻ്റെ ഒരു മുഖമുദ്രയാണ്.G. duodenalis alpha-2 giardine, alpha-7.3 giardine എന്നിവ വിവോയിലെ NLRP3 ഹോസ്റ്റ് ഇൻഫ്‌ളേമസോമിനെ സജീവമാക്കുന്നുണ്ടോ എന്ന് നിർണ്ണയിക്കാൻ, ഞങ്ങൾ ചികിത്സിക്കാത്ത WT എലികളും (ഷാം ഗ്രൂപ്പ്), NLRP3 ഇൻഫ്‌ളേമസോം-ബ്ലോക്ക്ഡ് എലികളും (MCC950 ഇൻഹിബിറ്റഡ് ട്രീറ്റ്‌മെൻ്റ് ഗ്രൂപ്പ്) ഉപയോഗിച്ചു.പരീക്ഷണത്തിൻ്റെ വിശദമായ സ്കീം ചിത്രം 4a ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു.PBS, G. duodenalis cyst ചികിത്സ, pcDNA3.1-ൻ്റെ ഇൻട്രാമുസ്‌കുലർ ഇൻജക്ഷൻ, pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine അല്ലെങ്കിൽ pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine എന്നിവയുടെ ഇൻട്രാമുസ്‌കുലർ കുത്തിവയ്‌പ്പ് എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് പരീക്ഷണാത്മക ഗ്രൂപ്പുകൾ ഉൾപ്പെട്ടിരുന്നു.റീകോമ്പിനൻ്റ് പ്ലാസ്മിഡിൻ്റെ ഇൻട്രാമുസ്കുലർ അഡ്മിനിസ്ട്രേഷന് ശേഷം 7-ാം ദിവസം, സെറം ശേഖരിക്കുകയും ഓരോ ഗ്രൂപ്പിലെയും IL-1β ൻ്റെ അളവ് നിർണ്ണയിക്കുകയും ചെയ്തു.ചിത്രം 4b-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, MOCK ഗ്രൂപ്പിൽ: (i) PBS ഗ്രൂപ്പുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, pcDNA3.1 ചികിത്സ IL-1β സ്രവത്തിൽ കാര്യമായ സ്വാധീനം ചെലുത്തിയില്ല (ANOVA, F(4.29)=4.062, P=0.9998), എന്നിരുന്നാലും, IL-β സ്രവണം G. duodenalis cyst ഗ്രൂപ്പിൽ (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0002), (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine, pcDNA3 എന്നിവയിൽ ഗണ്യമായി ഉയർന്നു.1- ആൽഫ-7.3 ഗിയാർഡിൻറെ ഇൻട്രാമുസ്കുലർ കുത്തിവയ്പ്പ് സെറം IL-1β ലെവലുകൾ ഗണ്യമായി വർദ്ധിപ്പിച്ചു (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P<0.0001);(iii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine intramuscular injection group (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0333) pcDNA3.1-alpha-7,3 ജിയാർഡിൻ ഉയർന്ന തലത്തിലുള്ള IL -1β സ്രവണം ഉണ്ടാക്കി. .MCC950 ചികിത്സ ഗ്രൂപ്പിലെയും MOCK ഗ്രൂപ്പിലെയും ഓരോ ഗ്രൂപ്പുമായും താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ: (i) MCC950 ഇൻഹിബിറ്ററിനെ തടഞ്ഞതിന് ശേഷം PBS കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പിലെയും pcDNA3.1 കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പിലെയും IL-1β സ്രവത്തിൻ്റെ അളവ് ഒരു പരിധിവരെ കുറഞ്ഞു, പക്ഷേ വ്യത്യാസം ഉണ്ടായിരുന്നില്ല. കാര്യമായ (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) MCC950 തടഞ്ഞതിന് ശേഷം., IL-1β സ്രവണം G. duodenalis cyst-infected group, pcDNA3.1-alpha-2 giardine group, pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine group (G. duodenalis: ANOVA, F(9) എന്നിവയിൽ ഗണ്യമായി കുറഞ്ഞു. , 58) = 3.540 , പി = 0.0120 ) = 3.540, പി = 0.0164).ഈ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത് ആൽഫ-2 ജിയാർഡിനും ആൽഫ-7.3 ജിയാർഡിനും വിവോയിലെ എൻഎൽആർപി3 ഇൻഫ്‌ളേമസോമിനെ സജീവമാക്കുന്നതിന് മധ്യസ്ഥത വഹിക്കുന്നു എന്നാണ്.
pcDNA3.1(+)-ജിയാർഡിനുകൾ വിവോയിൽ NLRP3 ഹോസ്റ്റ് ഇൻഫ്‌ളേമസമിനെ സജീവമാക്കുന്നു.പ്ലാസ്മിഡ് pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine അല്ലെങ്കിൽ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് എലികൾക്ക് പ്രതിരോധ കുത്തിവയ്പ്പ് നൽകി (IM) തുടർന്ന് MCC950 (ip; MCC950 ഗ്രൂപ്പ്) അല്ലെങ്കിൽ അല്ല (ഡമ്മി ഗ്രൂപ്പ്) ).PBS അല്ലെങ്കിൽ pcDNA3.1(+) പ്ലാസ്മിഡ് ട്രീറ്റ്മെൻ്റ് ഗ്രൂപ്പ് നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ ആയി ഉപയോഗിച്ചു, G. duodenalis cyst ചികിത്സ ഗ്രൂപ്പ് പോസിറ്റീവ് കൺട്രോളായി ഉപയോഗിച്ചു.പരീക്ഷണാത്മക ഗ്രൂപ്പും ചികിത്സാ രീതിയും.b എലിസയിലെ IL-1β ൻ്റെ സെറം അളവ് 7-ാം ദിവസം ELISA അസ്സെ അളന്നു.MOCK ഗ്രൂപ്പിലെ ഗ്രൂപ്പുകൾ തമ്മിലുള്ള വ്യത്യാസങ്ങൾ വൺ-വേ ANOVA ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്തു, കൂടാതെ MOCK ഗ്രൂപ്പും MCC950 ഗ്രൂപ്പും തമ്മിലുള്ള വ്യത്യാസങ്ങൾ SPSS സോഫ്റ്റ്‌വെയർ പതിപ്പ് 22.0-ൻ്റെ ടി-ടെസ്റ്റ് ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്തു.MOCK ഗ്രൂപ്പിലെ ചികിത്സ ഗ്രൂപ്പുകൾ തമ്മിലുള്ള കാര്യമായ വ്യത്യാസങ്ങൾ നക്ഷത്രചിഹ്നങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു, *P<0.05, ***P<0.001;ഡോളർ ചിഹ്നങ്ങൾ ($) MOCK ഗ്രൂപ്പിലെ ഓരോ ഗ്രൂപ്പും P<0.05-ൽ MCC950 ഗ്രൂപ്പും തമ്മിലുള്ള കാര്യമായ വ്യത്യാസങ്ങളെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.ഏഴ് സ്വതന്ത്ര ജൈവ പരീക്ഷണങ്ങളുടെ ഫലങ്ങൾ.i, intramuscular injection, ns, പ്രാധാന്യമില്ല (P > 0.05)
ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് ഇൻഫെക്റ്റിവിറ്റിയിൽ NLRP3 ഹോസ്റ്റ് ഇൻഫ്‌ളേമസോമിൻ്റെ ആൽഫ-2, ആൽഫ-7.3 ഗിയാർഡിൻ-മെഡിയേറ്റഡ് ആക്റ്റിവേഷൻ എന്നിവയുടെ ഫലത്തെക്കുറിച്ച് അന്വേഷിക്കാൻ, ഞങ്ങൾ WT C57BL/6 എലികൾ ഉപയോഗിക്കുകയും ആൽഫ-2 ജിയാർഡിൻ, ആൽഫ-7.3 ഗിയാർഡിൻ എന്നിവ കുത്തിവയ്ക്കുകയും ചെയ്തു.ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് സിസ്റ്റിൻ്റെ ഗ്യാസ്ട്രിക് ട്യൂബിലൂടെ 3 ദിവസത്തിന് ശേഷം പ്ലാസ്മിഡ് ഇൻട്രാമുസ്കുലറായി കുത്തിവയ്ക്കപ്പെട്ടു, അതിനുശേഷം എലികളെ 7 ദിവസത്തേക്ക് നിരീക്ഷിച്ചു.പരീക്ഷണത്തിൻ്റെ വിശദമായ സ്കീം ചിത്രം 5a ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു.ഓരോ എലിയുടെയും ശരീരഭാരം എല്ലാ ദിവസവും അളക്കുന്നു, ഗ്യാസ്ട്രിക് ട്യൂബിലൂടെ അഡ്മിനിസ്ട്രേഷന് ശേഷം 7-ാം ദിവസം പുതിയ ഡുവോഡിനൽ ടിഷ്യുവിൻ്റെ സാമ്പിളുകൾ ശേഖരിക്കുകയും ട്രോഫോസോയിറ്റുകളുടെ എണ്ണം അളക്കുകയും ഹിസ്റ്റോപാത്തോളജിക്കൽ മാറ്റങ്ങൾ നിരീക്ഷിക്കുകയും ചെയ്തു.ചിത്രം 5 ബിയിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, ഭക്ഷണ സമയം വർദ്ധിക്കുന്നതിനനുസരിച്ച്, ഓരോ ഗ്രൂപ്പിലെയും എലികളുടെ BW ക്രമേണ വർദ്ധിച്ചു.ജി ഡുവോഡിനാലിസ് സിസ്റ്റുകളുടെ ഇൻട്രാഗാസ്ട്രിക് അഡ്മിനിസ്ട്രേഷന് ശേഷം 3-ാം ദിവസം എലികളുടെ എംടി കുറയാൻ തുടങ്ങി, തുടർന്ന് ക്രമേണ വർദ്ധിച്ചു.ആൽഫ-2 ഗിയാർഡിൻ, ആൽഫ7.3 ജിയാർഡിൻ എന്നിവയുടെ ഇൻട്രാമുസ്‌കുലർ കുത്തിവയ്‌പ്പിലൂടെ പ്രചോദിതമായ NLRP3 ഇൻഫ്‌ളമസോമിൻ്റെ സജീവമാക്കൽ എലികളുടെ ഭാരം ഗണ്യമായി കുറയ്ക്കുന്നു (ദിവസം 1: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 39) = P1. = 0 .9754 ദിവസം 1: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30)=1.399, P=0.9987 Day 2: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F( 4, 30) = 0.3172, P = 0.9979; ദിവസം 2: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.8409 4 , F(4, 30) = 0.5620, P = 0.0012, ദിവസം 4: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5620, P <0.0001, ദിവസം 5: pcDNA3.1-alpha 2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P <0.0001 Day 5: pcDNA3.1-alpha -7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P <0.0001 Day 6: pcDNA alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0012, Day 6: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0006;ദിവസം 7: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P<0.0001 Day 7: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4 , 30) = 0.5369, P <0.0001).ഡുവോഡിനത്തിൽ പരാന്നഭോജികളുടെ ലോഡ് വിലയിരുത്തി (ചിത്രം 5 സി).ചികിത്സയില്ലാത്ത പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണവും ശൂന്യമായ pcDNA3.1 വെക്റ്റർ ഉപയോഗിച്ച് കുത്തിവച്ച ഗ്രൂപ്പുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, α-2 ജിയാർഡിൻ, α-7,3 ഗിയാർഡിൻ (pcDNA3.1-ആൽഫ) കുത്തിവച്ച ഗ്രൂപ്പുകളിൽ G. ഡുവോഡിനാലിസ് ട്രോഫോസോയിറ്റുകളുടെ എണ്ണം ഗണ്യമായി കുറഞ്ഞു. -2 giardine : ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0002, pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P<0.0001).കൂടാതെ, ജിയാർഡിൻ ആൽഫ-7.3 എലികളിൽ ജിയാർഡിൻ ആൽഫ-2 (ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0081) എന്നതിനേക്കാൾ കൂടുതൽ സംരക്ഷിതമായിരുന്നു.HE സ്റ്റെയിനിംഗിൻ്റെ ഫലങ്ങൾ അത്തിയിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു.5d-f.ആൽഫ-2 ജിയാർഡിൻ, ആൽഫ-7.3 ജിയാർഡിൻ എന്നിവ കുത്തിവച്ച എലികൾക്ക് ഡുവോഡിനൽ ടിഷ്യൂ നിഖേദ് കുറവായിരുന്നു, വില്ലസ് കേടുപാടുകൾ പ്രകടമാണ്.(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0035 അല്ലെങ്കിൽ P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, = 0.0028 അല്ലെങ്കിൽ P = 0.0055) കൂടാതെ കുറഞ്ഞ ക്രിപ്റ്റ് അട്രോഫിയും (pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.470, P = 0.0264 അല്ലെങ്കിൽ P = 0.0158; pcDNA3.3.1-alphaardine: ANO. , F(3, 24) = 1.470, P = 0.0371 അല്ലെങ്കിൽ P = 0.0191).ഈ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത് ആൽഫ-2 ജിയാർഡിനും ആൽഫ-7,3 ജിയാർഡിനും വിവോയിൽ എൻഎൽആർപി3 ഇൻഫ്ലമസമിനെ സജീവമാക്കുന്നതിലൂടെ ജി. ഡുവോഡിനാലിസിൻ്റെ അണുബാധ കുറയ്ക്കുന്നു.
ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് അണുബാധയിൽ pcDNA3.1(+)-ജിയാർഡിനുകളുടെ പങ്ക്.പുനഃസംയോജന യൂക്കറിയോട്ടിക് എക്സ്പ്രഷൻ പ്ലാസ്മിഡുകൾ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine അല്ലെങ്കിൽ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് എലികൾക്ക് പ്രതിരോധ കുത്തിവയ്പ്പ് (IM) നൽകുകയും തുടർന്ന് G. duodenalis cysts (ig) ഉപയോഗിച്ച് വെല്ലുവിളിക്കുകയും ചെയ്തു.PBS ഗ്രൂപ്പും pcDNA3.1(+) + ഡുവോഡിനൽ സിസ്റ്റ് ട്രീറ്റ്മെൻ്റ് ഗ്രൂപ്പും നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പായും ഡുവോഡിനൽ സിസ്റ്റ് ട്രീറ്റ്മെൻ്റ് ഗ്രൂപ്പിനെ പോസിറ്റീവ് കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പായും ഉപയോഗിച്ചു.പരീക്ഷണാത്മക ഗ്രൂപ്പും ചികിത്സാ രീതിയും.b വിവിധ ചികിത്സാ ഗ്രൂപ്പുകളിലെ എലികളുടെ MT ചലഞ്ച് കഴിഞ്ഞ് 7 ദിവസത്തേക്ക് നിരീക്ഷിച്ചു.G. duodenalis ഗ്രൂപ്പിലെയും pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ഗ്രൂപ്പിലെയും ഗ്രൂപ്പുകൾ തമ്മിലുള്ള കാര്യമായ വ്യത്യാസങ്ങൾ നക്ഷത്രചിഹ്നങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു, *P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001;ഡോളർ ചിഹ്നം ($) G. duodenalis-ൻ്റെ ഓരോ ഗ്രൂപ്പും pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 jardine group, $$P<0.01, $$$P<0.001 എന്നിവ തമ്മിലുള്ള കാര്യമായ വ്യത്യാസത്തെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.c ഡുവോഡിനത്തിൽ നിന്നുള്ള 1 മില്ലി ഡുവോഡിനൽ ലാവേജിലെ ട്രോഫോസോയിറ്റുകളുടെ എണ്ണം (3 സെൻ്റീമീറ്റർ നീളം) കണക്കാക്കി, ഡുവോഡിനത്തിൻ്റെ ഒരു സെൻ്റീമീറ്റർ പരാന്നഭോജികളുടെ എണ്ണം കണക്കാക്കിയാണ് പരാന്നഭോജികളുടെ ലോഡ് നിർണ്ണയിക്കുന്നത്.G. duodenalis അണുബാധ ഗ്രൂപ്പ്, pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ഗ്രൂപ്പ്, pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine ഗ്രൂപ്പ് എന്നിവ തമ്മിലുള്ള വ്യത്യാസങ്ങൾ SPSS സോഫ്റ്റ്‌വെയർ പതിപ്പ് 22.0 ഉപയോഗിച്ച് വൺ-വേ ANOVA ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്തു.നക്ഷത്രചിഹ്നങ്ങൾ **P<0.01, ***P<0.001 എന്നിവയിൽ കാര്യമായ വ്യത്യാസങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.d ഡുവോഡിനത്തിലെ ഹിസ്റ്റോപത്തോളജിക്കൽ മാറ്റങ്ങൾ.ചുവന്ന അമ്പടയാളങ്ങൾ വില്ലിനുണ്ടാകുന്ന നാശത്തെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു, പച്ച അമ്പുകൾ ക്രിപ്റ്റുകളുടെ കേടുപാടുകൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.സ്കെയിൽ ബാർ: 100 µm.e, f മൗസ് ഡുവോഡിനൽ വില്ലസ് ഉയരം (ഇ), ക്രിപ്റ്റ് ഉയരം (എഫ്) എന്നിവയുടെ സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ വിശകലനം.ചിത്രം 1d-യിലെ ഗ്രൂപ്പുകൾ തമ്മിലുള്ള വ്യത്യാസങ്ങൾ SPSS സോഫ്റ്റ്‌വെയർ പതിപ്പ് 22.0 ഉപയോഗിച്ച് വൺ-വേ ANOVA വിശകലനം ചെയ്തു.നക്ഷത്രചിഹ്നങ്ങൾ *P<0.05, **P<0.01 എന്നിവയിൽ കാര്യമായ വ്യത്യാസങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.ഏഴ് സ്വതന്ത്ര ജൈവ പരീക്ഷണങ്ങളുടെ ഫലങ്ങൾ.ns, പ്രാധാന്യമില്ല (P > 0.05)
ജിയാർഡിയാസിസിന് കാരണമാകുന്ന മനുഷ്യരുടെയും മറ്റ് സസ്തനികളുടെയും കുടൽ പരാന്നഭോജിയാണ് ജിയാർഡിയ ഡുവോഡിനം.2004-ൽ, WHO അവഗണിക്കപ്പെട്ട രോഗങ്ങളുടെ മുൻകൈയിൽ ഇത് ഉൾപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്, കാരണം 6 വർഷത്തിലേറെയായി, പ്രത്യേകിച്ച് താഴ്ന്ന സാമൂഹിക സാമ്പത്തിക നിലയുള്ള സമൂഹങ്ങളിൽ [32].ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് അണുബാധയ്ക്കുള്ള പ്രതിരോധ പ്രതികരണത്തിൽ സഹജമായ രോഗപ്രതിരോധ സംവിധാനം നിർണായക പങ്ക് വഹിക്കുന്നു.എലിയുടെ മാക്രോഫേജുകൾ എക്‌സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ ട്രാപ്പുകൾ പുറപ്പെടുവിച്ച് ജി.ഞങ്ങളുടെ മുൻ പഠനങ്ങൾ കാണിക്കുന്നത്, ഒരു നോൺ-ഇൻവേസിവ് എക്‌സ്‌ട്രാ സെല്ലുലാർ പരാന്നഭോജിയായ ജി.ഡുവോഡിനാലിസ്, ആതിഥേയ കോശജ്വലന പ്രതികരണങ്ങളെ നിയന്ത്രിക്കുന്നതിനായി മൗസ് മാക്രോഫേജുകളിൽ p38 MAPK, ERK, NF-κB p65, NLRP3 ഇൻഫ്ലമേറ്ററി സിഗ്നലിംഗ് പാതകൾ സജീവമാക്കുകയും GEV പുറത്തിറക്കിയതും ഈ പ്രക്രിയയെ മെച്ചപ്പെടുത്തിയേക്കാം.13], 24].എന്നിരുന്നാലും, GEV-യിലെ NLRP3 ഇൻഫ്‌ളേമസോം-റെഗുലേറ്റഡ് ഇൻഫ്‌ളമേറ്റിൽ ഉൾപ്പെട്ടിരിക്കുന്ന കൃത്യമായ PAMP-കളും ജിയാർഡിയാസിസിൽ NLRP3 ഇൻഫ്‌ളേമസോമിൻ്റെ പങ്കും വ്യക്തമല്ല.ഈ രണ്ട് ചോദ്യങ്ങളിലേക്ക് വെളിച്ചം വീശാനാണ് ഞങ്ങൾ ഈ പഠനം നടത്തിയത്.
പ്രതിരോധ കോശങ്ങളുടെ സൈറ്റോപ്ലാസ്മിലാണ് എൻഎൽആർപി3 ഇൻഫ്ലമസോം സ്ഥിതി ചെയ്യുന്നത്, യൂറിക് ആസിഡ് പരലുകൾ, വിഷവസ്തുക്കൾ, ബാക്ടീരിയകൾ, വൈറസുകൾ, പരാന്നഭോജികൾ തുടങ്ങിയ വിവിധ കണങ്ങളാൽ ഇത് സജീവമാക്കാം.ബാക്ടീരിയൽ പഠനങ്ങളിൽ, കോശജ്വലന സെൻസറുകൾ സജീവമാക്കുന്ന പ്രധാന PAMP- കളായി ടോക്സിനുകൾ തിരിച്ചറിഞ്ഞിട്ടുണ്ട്, ഇത് വീക്കം, കോശങ്ങളുടെ മരണത്തിലേക്ക് നയിക്കുന്നു [34].സ്റ്റാഫൈലോകോക്കസ് ഓറിയസിൽ നിന്നുള്ള ഹീമോലിസിൻ [35], എസ്ഷെറിച്ചിയ കോളി [36], എൻ്ററോടോക്സിനിൽ നിന്നുള്ള ഹീമോലിസിൻ BL (HBL) (NHE) [37] എന്നിങ്ങനെ ഘടനാപരമായി വ്യത്യസ്തമായ ചില വിഷവസ്തുക്കൾ NLRP3 വീക്കം സജീവമാക്കാൻ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നു.SARS-COV-2 എൻവലപ്പ് (E) പ്രോട്ടീൻ [38], Zika വൈറസ് NS5 പ്രോട്ടീൻ [39] തുടങ്ങിയ വൈറലൻസ് പ്രോട്ടീനുകൾ NLRP3 റിസപ്റ്റർ അംഗീകരിച്ച പ്രധാന PAMP-കളാണെന്ന് വൈറൽ പഠനങ്ങൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്.പരാന്നഭോജികളുടെ പഠനങ്ങളിൽ, ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഗോണ്ടി, ട്രൈക്കോമോണസ് വാഗിനാലിസ് [40], ട്രൈപനോസോമ ക്രൂസി [41], ലീഷ്മാനിയ [42] തുടങ്ങിയ നിരവധി പരാന്നഭോജികൾ ആതിഥേയ കോശജ്വലന പ്രവർത്തനവുമായി ബന്ധപ്പെട്ടതായി റിപ്പോർട്ട് ചെയ്യപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്.ലൂയിസ് എലി മാക്രോഫേജുകളിൽ പൈറോപ്‌റ്റോസിസ് ഇൻഡക്ഷൻ ചെയ്യുന്നതിന് ടോക്സോപ്ലാസ്മ ഗോണ്ടിയുടെ വൈറസുമായി ബന്ധപ്പെട്ട സാന്ദ്രമായ ഗ്രാനുൾ പ്രോട്ടീനുകളായ GRA35, GRA42, GRA43 എന്നിവ ആവശ്യമാണ് [43].കൂടാതെ, ചില ലീഷ്മാനിയ പഠനങ്ങൾ NLRP3 കോശജ്വലനത്തിൽ ഉൾപ്പെട്ടിരിക്കുന്ന വ്യക്തിഗത തന്മാത്രകളിൽ ശ്രദ്ധ കേന്ദ്രീകരിച്ചിട്ടുണ്ട്, അതായത് പാരസൈറ്റ് മെംബ്രൺ ലിപ്പോഫോസ്ഫോഗ്ലൈകാൻ [44] അല്ലെങ്കിൽ സിങ്ക് മെറ്റലോപ്രോട്ടീസ് [45].അനെക്‌സിൻ പോലെയുള്ള ആൽഫ-ജിയാർഡിൻ കുടുംബത്തിലെ ജീനുകളിൽ, ആൽഫ-1 ജിയാർഡിൻ ഒരു വാക്‌സിൻ കാൻഡിഡേറ്റ് ആണെന്ന് തെളിയിക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്, ഇത് ഒരു മൗസ് മോഡലിൽ ജി. ഡുവോഡിനാലിസിനെതിരെ സംരക്ഷണം നൽകുന്നു [18].ഞങ്ങളുടെ പഠനത്തിൽ, ജിയാർഡിയയ്ക്ക് മാത്രമുള്ളതും എന്നാൽ താരതമ്യേന കുറവ് റിപ്പോർട്ട് ചെയ്യപ്പെട്ടതുമായ ജി.ഈ രണ്ട് ടാർഗെറ്റ് ജീനുകളും വീക്കം സജീവമാക്കൽ വിശകലനത്തിനായി pcDNA3.1(+) യൂക്കറിയോട്ടിക് എക്സ്പ്രഷൻ സിസ്റ്റം വെക്റ്ററിലേക്ക് ക്ലോൺ ചെയ്തു.
ഞങ്ങളുടെ മൗസ് മോഡലിൽ, പിളർന്ന കാസ്‌പേസ് ശകലങ്ങൾ കോശജ്വലന പ്രവർത്തനത്തിൻ്റെ അടയാളങ്ങളായി വർത്തിക്കുന്നു.ഉത്തേജനത്തിന് ശേഷം, NLRP3 ASC-യുമായി ഇടപഴകുന്നു, പ്രോകാസ്‌പേസുകളെ റിക്രൂട്ട് ചെയ്യുന്നു, കൂടാതെ പ്രോ-IL-1β, പ്രോ-IL-18 എന്നിവയെ യഥാക്രമം -18 ആയി വിഭജിക്കുന്ന സജീവ കാസ്‌പേസുകൾ സൃഷ്ടിക്കുന്നു.കോശജ്വലന കാസ്‌പേസുകൾ (കാസ്‌പേസ്-1, -4, -5, -11) സിസ്റ്റൈൻ പ്രോട്ടീസുകളുടെ ഒരു സംരക്ഷിത കുടുംബമാണ്, അവ സഹജമായ പ്രതിരോധത്തിന് നിർണായകവും വീക്കം, പ്രോഗ്രാം ചെയ്‌ത കോശ മരണത്തിൽ ഏർപ്പെടുന്നു [46].കാസ്‌പേസ്-1 കാനോനിക്കൽ ഇൻഫ്‌ളേമാസോമുകൾ [47] സജീവമാക്കുന്നു, അതേസമയം കാസ്‌പേസ്-4, -5, -11 എന്നിവ വിഭിന്നമായ ഇൻഫ്‌ളേമാസോമുകളുടെ രൂപീകരണ സമയത്ത് പിളരുന്നു [48].ഈ പഠനത്തിൽ, ഞങ്ങൾ മൗസ് പെരിറ്റോണിയൽ മാക്രോഫേജുകൾ ഒരു മാതൃകയായി ഉപയോഗിക്കുകയും ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് അണുബാധയെക്കുറിച്ചുള്ള പഠനങ്ങളിൽ ഹോസ്റ്റ് NLRP3 വീക്കം സജീവമാക്കുന്നതിൻ്റെ മാർക്കറായി p20 കാസ്‌പേസ്-1 ക്ലീവ്ഡ് കാസ്‌പേസ്-1 അന്വേഷിക്കുകയും ചെയ്തു.ബാക്ടീരിയകളിലും വൈറസുകളിലും ഉൾപ്പെട്ടിരിക്കുന്ന പ്രധാന വൈറൽ തന്മാത്രകളുടെ കണ്ടെത്തലുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്ന, വീക്കം സാധാരണ സജീവമാക്കുന്നതിന് നിരവധി ആൽഫ-ജിയാർഡിനുകൾ ഉത്തരവാദികളാണെന്ന് ഫലങ്ങൾ കാണിച്ചു.എന്നിരുന്നാലും, ഞങ്ങളുടെ പഠനം ഒരു പ്രാഥമിക സ്‌ക്രീൻ മാത്രമാണ്, കൂടാതെ ക്ലാസിക്കൽ അല്ലാത്ത ഇൻഫ്‌ളേമസോമുകളെ സജീവമാക്കാൻ കഴിയുന്ന മറ്റ് തന്മാത്രകൾ ഉണ്ട്, ഞങ്ങളുടെ മുൻ പഠനത്തിൽ ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് അണുബാധയിൽ ക്ലാസിക്കൽ, നോൺ-ക്ലാസിക്കൽ ഇൻഫ്‌ളേമസോമുകൾ കണ്ടെത്തി [13].ജനറേറ്റുചെയ്‌ത p20 കാസ്‌പേസ്-1 NLRP3 ഇൻഫ്‌ളേമസമുമായി ബന്ധപ്പെട്ടതാണോ എന്ന് കൂടുതൽ നിർണ്ണയിക്കാൻ, ഞങ്ങൾ ആൽഫ-2, ആൽഫ-7.3 ഗിയാർഡിനുകളെ മൗസ് പെരിറ്റോണിയൽ മാക്രോഫേജുകളിലേക്ക് മാറ്റി, പ്രധാന തന്മാത്രകളുടെ പ്രോട്ടീൻ എക്‌സ്‌പ്രഷൻ ലെവലും ASC ഒലിഗോമറൈസേഷൻ ലെവലും നിർണ്ണയിക്കുന്നു, α-giardins രണ്ടും സജീവമാകുന്നുവെന്ന് സ്ഥിരീകരിക്കുന്നു. ജ്വലിക്കുന്ന NLRP3.G. muris അല്ലെങ്കിൽ E. coli EPEC സ്‌ട്രെയിനുകൾ ഉള്ള Caco-2 സെല്ലുകളുടെ ഉത്തേജനം NLRP3, ASC, കാസ്‌പേസ്-1 എന്നിവയുടെ ഫ്ലൂറസെൻസ് തീവ്രത വർദ്ധിപ്പിക്കുമെന്ന് റിപ്പോർട്ട് ചെയ്ത Manko-Prykhoda et al. ൽ നിന്ന് ഞങ്ങളുടെ ഫലങ്ങൾ അല്പം വ്യത്യസ്തമാണ്. കാര്യമായി ഇല്ലെങ്കിലും, G. muris, E. coli എന്നിവയുടെ കോസ്റ്റിമുലേഷൻ എങ്ങനെയാണ് മൂന്ന് പ്രോട്ടീനുകളുടെ അളവ് വർദ്ധിപ്പിച്ചത് [49].ജിയാർഡിയ സ്പീഷീസ്, സെൽ ലൈനുകൾ, പ്രൈമറി സെല്ലുകൾ എന്നിവയുടെ തിരഞ്ഞെടുപ്പിലെ വ്യത്യാസങ്ങൾ ഈ പൊരുത്തക്കേട് മൂലമാകാം.5 ആഴ്ച പ്രായമുള്ള WT C57BL/6 എലികളിൽ MCC950 ഉപയോഗിച്ച് ഞങ്ങൾ vivo പരിശോധനകൾ നടത്തി, അവ G. duodenalis-ന് കൂടുതൽ സാധ്യതയുള്ളവയാണ്.നാനോമോളാർ സാന്ദ്രതയിൽ കാനോനിക്കൽ, നോൺ-കാനോനിക്കൽ എൻഎൽആർപി3 ആക്ടിവേഷൻ തടയുന്ന ശക്തിയേറിയതും തിരഞ്ഞെടുത്തതുമായ ചെറിയ തന്മാത്ര എൻഎൽആർപി3 ഇൻഹിബിറ്ററാണ് എംസിസി950.MCC950 NLRP3 ആക്ടിവേഷനെ തടയുന്നു, എന്നാൽ AIM2, NLRC4, NLRP1 എന്നിവയെ സജീവമാക്കുന്നതിനെയോ TLR സിഗ്നലിംഗ് പാതകളെയോ ബാധിക്കില്ല [27].MCC950 NLRP3 സജീവമാക്കൽ തടയുന്നു, എന്നാൽ NLRP3 ആരംഭിക്കൽ, K+ എഫ്‌ഫ്‌ളക്‌സ്, Ca2+ ഇൻഫ്‌ളക്‌സ് അല്ലെങ്കിൽ NLRP3-യും ASC-യും തമ്മിലുള്ള പ്രതിപ്രവർത്തനം എന്നിവയെ തടയുന്നില്ല;പകരം, ഇത് എഎസ്‌സി ഒലിഗോമറൈസേഷൻ തടയുന്നതിലൂടെ എൻഎൽആർപി3 കോശജ്വലന പ്രവർത്തനത്തെ തടയുന്നു [27].അതിനാൽ, ജിയാർഡിൻ കുത്തിവയ്പ്പിന് ശേഷമുള്ള NLRP3 ഇൻഫ്‌ളേമസമിൻ്റെ പങ്ക് നിർണ്ണയിക്കാൻ ഞങ്ങൾ ഒരു ഇൻ വിവോ പഠനത്തിൽ MCC950 ഉപയോഗിച്ചു.സജീവമാക്കിയ കാസ്‌പേസ്-1 p10 പ്രോ-ഇൻഫ്ലമേറ്ററി സൈറ്റോകൈനുകൾ പ്രോ-IL-1β, പ്രോ-IL-18 എന്നിവയെ മുതിർന്ന IL-1β, IL-18 [50] ആക്കി മാറ്റുന്നു.ഈ പഠനത്തിൽ, MCC950 ഉപയോഗിച്ചോ അല്ലാതെയോ ജിയാർഡിൻ ചികിത്സിച്ച എലികളിലെ സെറം IL-1β ലെവലുകൾ NLRP3 ഇൻഫ്‌ളേമസോം സജീവമാക്കിയിട്ടുണ്ടോ എന്നതിൻ്റെ സൂചകമായി ഉപയോഗിച്ചു.പ്രതീക്ഷിച്ചതുപോലെ, MCC950 ചികിത്സ സെറം IL-1β അളവ് ഗണ്യമായി കുറച്ചു.ജി. ഡുവോഡിനാലിസ് ഗിയാർഡിൻ ആൽഫ-2, ജിയാർഡിൻ ആൽഫ-7.3 എന്നിവയ്ക്ക് എൻഎൽആർപി3 മൗസ് ഇൻഫ്ളമസമിനെ സജീവമാക്കാൻ കഴിയുമെന്ന് ഈ ഡാറ്റ വ്യക്തമായി തെളിയിക്കുന്നു.
IL-17A എന്നത് G. മൂറിസിനെതിരായ പ്രതിരോധശേഷിയുടെ പ്രധാന റെഗുലേറ്ററാണെന്നും IL-17RA സിഗ്നലിംഗ് പ്രേരിപ്പിക്കുകയും ആൻ്റിമൈക്രോബയൽ പെപ്റ്റൈഡുകൾ ഉത്പാദിപ്പിക്കുകയും കോംപ്ലിമെൻ്റ് ആക്റ്റിവേഷൻ നിയന്ത്രിക്കുകയും ചെയ്യുന്നുവെന്ന് കഴിഞ്ഞ ദശകത്തിൽ ശേഖരിച്ച സുപ്രധാന ഡാറ്റ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട് [51].എന്നിരുന്നാലും, പ്രായപൂർത്തിയായവരിൽ Giardia അണുബാധ കൂടുതലായി കാണപ്പെടുന്നു, കൂടാതെ യുവ എലികളിലെ Giardia അണുബാധ IL-17A പ്രതികരണത്തെ അതിൻ്റെ സംരക്ഷണ പ്രഭാവം ചെലുത്താൻ സജീവമാക്കുന്നില്ല [52], മറ്റ് ഇമ്മ്യൂണോമോഡുലേറ്ററി Giardia തിരയാൻ ഗവേഷകരെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നു.ഹെൽമിൻത്ത് അണുബാധയുടെ സംവിധാനങ്ങൾ.G. മൂരിസിന് E. coli EPEC മുഖേന NLRP3 കോശജ്വലനം സജീവമാക്കാൻ കഴിയുമെന്ന് അടുത്തിടെ നടത്തിയ ഒരു പഠനത്തിൻ്റെ രചയിതാക്കൾ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തു, ഇത് ആൻ്റിമൈക്രോബയൽ പെപ്റ്റൈഡുകളുടെ ഉത്പാദനം പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുകയും അതിൻ്റെ അറ്റാച്ച്മെൻ്റ് കപ്പാസിറ്റിയും കുടലിലെ ട്രോഫോസോയിറ്റുകളുടെ എണ്ണവും കുറയ്ക്കുകയും അതുവഴി വൻകുടലിൻ്റെ തീവ്രത കുറയ്ക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. ബാസിലി മൂലമുണ്ടാകുന്ന രോഗങ്ങൾ [49].വിവിധ രോഗങ്ങളുടെ വികസനത്തിൽ എൻഎൽആർപി 3 ഇൻഫ്ലമസോം ഉൾപ്പെടുന്നു.കോശമരണം ഒഴിവാക്കാൻ സ്യൂഡോമോണസ് എരുഗിനോസ മാക്രോഫേജുകളിൽ ഓട്ടോഫാഗിയെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നുവെന്ന് പഠനങ്ങൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്, ഈ പ്രക്രിയ എൻഎൽആർപി 3 ഇൻഫ്ലമസമിൻ്റെ സജീവമാക്കലിനെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു [53].N. Caninum-ന്, NLRP3 ഇൻഫ്‌ളമസോമിൻ്റെ റിയാക്ടീവ് ഓക്‌സിജൻ സ്‌പീഷീസ്-മെഡിയേറ്റഡ് ആക്‌റ്റിവേഷൻ ഹോസ്‌റ്റിലെ അതിൻ്റെ തനിപ്പകർപ്പിനെ പരിമിതപ്പെടുത്തുന്നു, ഇത് ഒരു ചികിത്സാ ലക്ഷ്യമാക്കി മാറ്റുന്നു [9].മൗസ് ബോൺ മജ്ജയിൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ ഡെൻഡ്രിറ്റിക് സെല്ലുകളിൽ എൻഎൽആർപി3 ഇൻഫ്‌ളേമസമിനെ സജീവമാക്കാൻ പാരാകോക്സിഡോയിഡ്സ് ബ്രസീലിയൻസിസ് പ്രേരിപ്പിക്കുന്നതായി കണ്ടെത്തിയിട്ടുണ്ട്, ഇത് ആതിഥേയ പ്രതിരോധത്തിൽ നിർണായക പങ്കുവഹിക്കുന്ന കോശജ്വലന സൈറ്റോകൈൻ IL-1β പുറത്തുവിടുന്നു.L. amazonensis, L. major, L. Braziliensis, L. infantum chagasi എന്നിവയുൾപ്പെടെ നിരവധി ലീഷ്മാനിയ സ്പീഷീസുകൾ, മാക്രോഫേജുകളിൽ NLRP3, ASC- ആശ്രിത കാസ്‌പേസ്-1 എന്നിവയും ലീഷ്മാനിയ അണുബാധയും സജീവമാക്കുന്നു.NLRP3/ASC/caspase-1 ജീനിൽ [11] കുറവുള്ള എലികളിൽ പാരസൈറ്റ് റെപ്ലിക്കേഷൻ വർദ്ധിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു.സാംബോണി et al.ഇൻട്രാ സെല്ലുലാർ പാരസൈറ്റ് റെപ്ലിക്കേഷനെ പരിമിതപ്പെടുത്തുന്ന മാക്രോഫേജുകളിൽ എൻഎൽആർപി3 ഇൻഫ്‌ളേമസോമിനെ സജീവമാക്കാൻ ലീഷ്മാനിയ അണുബാധ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നതായി റിപ്പോർട്ട് ചെയ്യപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്.അതിനാൽ, ഒരു ഒഴിവാക്കൽ തന്ത്രമായി ലീഷ്മാനിയ NLRP3 സജീവമാക്കലിനെ തടഞ്ഞേക്കാം.വിവോ പഠനങ്ങളിൽ, എൻഎൽആർപി 3 വീക്കം ലീഷ്മാനിയയെ ഇല്ലാതാക്കാൻ കാരണമായി, പക്ഷേ ടിഷ്യൂകളെ ബാധിച്ചില്ല [54].നേരെമറിച്ച്, ഹെൽമിൻത്തിയാസിസ് പഠനങ്ങളിൽ, എൻഎൽആർപി 3 ഇൻഫ്‌ളേമസോമിൻ്റെ സജീവമാക്കൽ ഗ്യാസ്ട്രോഇൻ്റസ്റ്റൈനൽ ഹെൽമിൻത്തിയാസിസിനെതിരായ ഹോസ്റ്റിൻ്റെ പ്രതിരോധശേഷിയെ അടിച്ചമർത്തുന്നു [12].ലോകമെമ്പാടും വയറിളക്കമുണ്ടാക്കുന്ന പ്രധാന ബാക്ടീരിയകളിലൊന്നാണ് ഷിഗെല്ല.ഈ ബാക്ടീരിയകൾക്ക് P2X7 റിസപ്റ്റർ-മെഡിയേറ്റഡ് K+ എഫക്‌സ്, റിയാക്ടീവ് ഓക്‌സിജൻ സ്പീഷീസ്, ലൈസോസോമൽ അസിഡിഫിക്കേഷൻ, മൈറ്റോകോണ്ട്രിയൽ കേടുപാടുകൾ എന്നിവയിലൂടെ IL-1β ഉൽപ്പാദനം പ്രേരിപ്പിക്കാൻ കഴിയും.NLRP3 ഇൻഫ്‌ളേമസോം ഷിഗെല്ലയ്‌ക്കെതിരായ മാക്രോഫേജുകളുടെ ഫാഗോസൈറ്റോസിസിനെയും ബാക്ടീരിയ നശിപ്പിക്കുന്ന പ്രവർത്തനത്തെയും പ്രതികൂലമായി നിയന്ത്രിക്കുന്നു [55].പ്ലാസ്‌മോഡിയം ബാധിച്ച എഐഎം2, എൻഎൽആർപി3 അല്ലെങ്കിൽ കാസ്‌പേസ്-1 അപര്യാപ്തമായ എലികൾ ഉയർന്ന അളവിലുള്ള ടൈപ്പ് 1 ഇൻ്റർഫെറോൺ ഉൽപ്പാദിപ്പിക്കുന്നുവെന്നും പ്ലാസ്മോഡിയം അണുബാധയെ കൂടുതൽ പ്രതിരോധിക്കുമെന്നും പ്ലാസ്മോഡിയം പഠനങ്ങൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട് [56].എന്നിരുന്നാലും, എലികളിൽ NLRP3 വീക്കം രോഗകാരിയായി സജീവമാക്കുന്നതിൽ ആൽഫ-2 ജിയാർഡിൻ, ആൽഫ-7.3 ഗിയാർഡിൻ എന്നിവയുടെ പങ്ക് വ്യക്തമല്ല.
ഈ പഠനത്തിൽ, MCC950 മുഖേന NLRP3 ഇൻഫ്‌ളമസമിനെ തടയുന്നത് BW കുറയ്ക്കുകയും എലികളിലെ കുടൽ ലാവേജ് ദ്രാവകത്തിൽ ട്രോഫോസോയിറ്റുകളുടെ എണ്ണം വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു, ഇത് ഡുവോഡിനൽ ടിഷ്യുവിൽ കൂടുതൽ ഗുരുതരമായ പാത്തോളജിക്കൽ മാറ്റങ്ങൾക്ക് കാരണമാകുന്നു.ആൽഫ-2 ജിയാർഡിൻ, ആൽഫ-7.3 ജിയാർഡിൻ എന്നിവ ആതിഥേയ മൗസ് എൻഎൽആർപി 3 ഇൻഫ്ളമസമിനെ സജീവമാക്കുന്നു, എലിയുടെ ശരീരഭാരം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു, കുടൽ ലാവേജ് ദ്രാവകത്തിലെ ട്രോഫോസോയിറ്റുകളുടെ എണ്ണം കുറയ്ക്കുന്നു, കൂടാതെ പാത്തോളജിക്കൽ ഡുവോഡിനൽ നിഖേദ് ലഘൂകരിക്കുന്നു.ആൽഫ-2 ഗിയാർഡിൻ, ആൽഫ-7,3 ജിയാർഡിൻ എന്നിവയിലൂടെ ജി. ഡുവോഡിനാലിസിന് എൻ.എൽ.ആർ.പി.3 ഹോസ്റ്റ് ഇൻഫ്‌ളേമസമിനെ സജീവമാക്കാൻ കഴിയുമെന്ന് ഈ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു, ഇത് എലികളിലെ ജി.
മൊത്തത്തിൽ, ആൽഫ-2, ആൽഫ-7.3 ഗിയാർഡിനുകൾ NLRP3 ഹോസ്റ്റ് ഇൻഫ്‌ളേമസമിനെ സജീവമാക്കുകയും എലികളിലെ G. ഡുവോഡിനാലിസിൻ്റെ അണുബാധ കുറയ്ക്കുകയും ചെയ്യുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങളുടെ ഫലങ്ങൾ തെളിയിക്കുന്നു.അതിനാൽ, ഈ തന്മാത്രകൾ ജിയാർഡിയാസിസ് തടയുന്നതിനുള്ള വാഗ്ദാന ലക്ഷ്യങ്ങളാണ്.
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
ലിയാങ് എകെഎസ്, ലിയാങ് എഎഎം, ഹുവാങ് എഎച്ച്സി, സെർജി കെഎം, കാം ജെകെഎം.ജിയാർഡിയാസിസ്: ഒരു അവലോകനം.പാറ്റ് ഇൻഫ്ലാമിന് മരുന്നുകളോട് അലർജിയുണ്ടെന്ന് അടുത്തിടെ വെളിപ്പെടുത്തിയിരുന്നു.2019;13:134–43.
Escobedo AA, Tsimerman S. Giardiasis: a review of pharmacotherapy.ഒരു ഫാർമസിസ്റ്റിൻ്റെ വിദഗ്ദ്ധ അഭിപ്രായം.2007;8: 1885-902.
ടിയാൻ ഹുഫെങ്, ചെൻ ബിൻ, വെൻ ജിയാൻഫെങ്.ജിയാർഡിയാസിസ്, മയക്കുമരുന്ന് പ്രതിരോധം, പുതിയ ലക്ഷ്യങ്ങളുടെ കണ്ടെത്തൽ.ഡിസോർഡ് മയക്കുമരുന്ന് ലക്ഷ്യങ്ങളെ ബാധിക്കുന്നു.2010;10:295–302.
വാങ് ഇസഡ്, ഷാങ് എക്സ്, സിയാവോ യി, ഷാങ് ഡബ്ല്യു, വു എക്സ്, ക്വിൻ ടി മുതലായവ. NLRP3 കോശജ്വലനവും കോശജ്വലനവുമായ രോഗങ്ങൾ.ഓക്സൈഡ് മെഡ് സെൽ ലോംഗേവ്.2020;2020:4063562.
ചെൻ ജിവൈ, ന്യൂനെസ് ജി. കുടൽ വീക്കത്തിലും ക്യാൻസറിലും ഇൻഫ്‌ളേമസോമിൻ്റെ പങ്ക്.ഗ്യാസ്ട്രോഎൻട്രോളജി.2011;141:1986–99.
Pellegrini C, Antonioli L, Lopez-Castejon G, Blandizzi C, Fornai M. പ്രതിരോധശേഷി സഹിഷ്ണുതയുടെയും കുടൽ വീക്കത്തിൻ്റെയും ക്രോസ്റോഡുകളിൽ കാനോനിക്കൽ, വിഭിന്നമായ NLRP3 ജ്വലനം സജീവമാക്കൽ.പ്രീ-ഇമ്മ്യൂൺ.2017;8:36.
ലി എൽ, വാങ് എക്‌സ്‌സി, ഗോങ് പിടി, ഷാങ് എൻ, ഷാങ് എക്സ്, ലി എസ്, തുടങ്ങിയവർ.N. caninum അണുബാധയ്ക്കുള്ള പ്രതികരണത്തിൽ ROS- മധ്യസ്ഥതയിലുള്ള NLRP3 കോശജ്വലനം സജീവമാക്കൽ ഉൾപ്പെടുന്നു.പാരസൈറ്റ് വെക്റ്റർ.2020;13:449.